Начальная

Windows Commander

Far
WinNavigator
Frigate
Norton Commander
WinNC
Dos Navigator
Servant Salamander
Turbo Browser

Winamp, Skins, Plugins
Необходимые Утилиты
Текстовые редакторы
Юмор

File managers and best utilites

Проведение гематологического обследования рыб. Гематология рыб


Гематологическое исследование

Подробности

Просмотров: 1795

По изменениям, происходящим в крови, можно судить о патологических процессах, протекающих в организме рыб. Результаты исследований крови с учетом клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных позволяют уточнить диагноз болезни (табл. 12, 13, 14, 15).

Таблица 12. Значение клинических показателей крови рыб ПоказательНизкие значенияВысокие значения
Эритроцыты Анемия, гемолиз, нарушение осморегуляции, ровреждение жабр Стрессовая пилицитамия, дегидрадация, сгущение крови.
лейкоциты Стрессовая лейкоперия Лейкоцитоз - реакция на бактериальную инфекцию
Тромбоциты Слабая свертываемость крови Тромбоцитоз из-за хронического стресса
Хлориды Нарушение осморегуляции Сгущение крови
Холестерин Нарушение жирового обмена Хронический стресс, жировая перегрузка при кормлении
Время свертывания крови Острый стресс, тромбоцитопения Воздействие антибиотиков или сульфамидов
Глюкоза Крайнее истощение Острый или хронический стресс
гликоген Хронический стресс, истощение Несбалансированная диета, повреждение печени
Гематокрит Анемия, гемолиз, повреждение жабр Сгущение крови, стресс, полицитемия
Гемоглобин Анемия, гемолиз, повреждение жабр Сгущение крови, стресс, полицитемия
Метгемоглобин Норма Воздейтвие нитритов и некоторых других токсикантов, пересыщение воды кислородом
Белок Истощение, инфекционные болезни, повреждение почек, неправильное кормление Сгущение крови, нарушение водного баланса, гемолиз, интенсивный рост гонад

 

Таблица 13. Показатели красной крови у пресноводных рыб РыбаМасса, гГематокрит, %Гемоглобин, г%Эритроциты млн/мклПримечание
Щука - 24-44 - 1-2 Озеро, разновыростные группы
Белый толстолобик 16,0 43 11,4 2,2 Пруд, весна - лето
Белый толстолобик 140 42 11 2,1 Пруд, осень
Пестрый толстолобик - 30-37 7,5-8,5 1,14-2,0 Корм - сухие сине-зеленые + комбикорм
Белый амур 27 32 8,6 1,8 Пруд, весна
  320 34 9,6 1,9 Пруд, осень
Карп 17 - 8,9 1,8 Лето, естественные условия
Карп 10-22 - 7,5-8,8 1,4-1,7 Зимовка, ноябрь - декабрь
Карп 10-22 - 8,2-8,7 1,3-1,6 Зимовка, февраль - март
Карп 200-350 - 8,6-9,9 1,4-1,7 Лето, июнь - июль
Карп 400-500 38 8,6-10,4 1,14-1,44 Осень

 

Таблица 14. Количество лейкоцитов в крови у рыб, тыс/мкл РыбаВозрастКоличество лейкоцитовПримечание
Лещ - 45-120 Сезонные колебания
Угорь - 90 -
Щука - 28-110 Сезонные колебания
Судак - 35-95 Сезонные колебания
Голавль - 40 Сезонные колебания
Карась - 51 -
Линь - 52 -
Карп 0+ 14-17 Пруд
Карп, 20-26 г - 9-23 Пруд
Карп, 300-700 г - 22-23 Пруд
Карп, 1400 г - 43-59 Пруд
Карп - 23 Самец-производитель
Карп - 16 Самка-производитель
Белый толстолоб 1+ 98±14 Пруд
Пестрый толстолобик 1+ 62±8 Пруд
Радужная форель - 34 Пруд
Ручьевая форель - 26 Пруд

 

Таблица 15. Состав и свойства крови рыб ПоказателиБелугаСтерлядьОсетрСеврюгаЛососьФорельЩукаЛиньЛещКарасьСазанОкуньСом
Эритроциты, млн/мкл 0,8 1,5 0,8 1,6 1,3 1,2 1,4 1,8 1,7 1,6 2,6 1,5 1,4
Гемоглобин, г% 8,7 10,3 11,5 11,3 9,8 10,0 7,9 8,9 9,6 8,9 9,7 9,1 7,0
Гематокрит, % 36,0 43,0 47,0 40,0 36,0 30,0 20,0 22,0 24,0 23,0 27,0 29,0 20,0
Общее количество крови к массе тела, % 2,8 3,2 2,5 3,0 2,3 2,4 2,0 1,9 3,9 4,2 2,5 1,2 1,6
Количество лейкоцитов, тыс/мкл - - - 40,4 32,0 25,5 37,5 52,0 49,0 51,0 43,0 40,0 38,0
Лейкоцитарная формула, %                          
эозинофилы - - - - - - - - - - - - -
нейтрофилы - - - - 12,0 18,0 9,0 4,0 18,0 15,0 6,0 9,0 11,0
полиморфоядные - - - - 15,0 2,0 4,0 1,0 2,0 6,0 3,0 4,0 2,0
лимфоцыты - - - - 71,0 64,0 84,0 93,0 77,0 76,0 88,0 85,0 76,0
моноциты - - - - 2,0 16,0 3,0 2,0 3,0 3,0 3,0 2,0 1,0
Белок общий, % - - 5,1 5,9 6,3 5,8 6,7 3,6 4,7 5,1 7,1 8,5 6,8

Кровь для исследования берут пастеровской пипеткой из сосудов гемального канала хвостового стебля. Место взятия обрабатывают 70%-ным спиртом, просушивают ватным тампоном.

Определение количества эритроцитов и лейкоцитов. Кровь набирают в смеситель меланжера, используемого для подсчета эритроцитов млекопитающих, до метки 0,5 или 1 и насасывают жидкость для окрашивания и разведения крови до метки 101 (раствор А: нейтральрот - 25 мг; натрий хлористый - 0,6 г, вода дистиллированная-100 мл; раствор Б: кристаллвиолет - 12 мг, натрий лимоннокислый - 3,8 мг, формалин - 0,4 мл, вода дистиллированная - 100 мл). Раствор А набирают до половины расширения смесителя, раствор Б - до метки 101. (Готовят эти растворы непосредственно перед исследованием, хранить можно в холодильнике не более недели.) Под действием растворов ядра лейкоцитов окрашиваются в фиолетово-красный цвет, а цитоплазма - в розовый. В эритроцитах ядра окрашиваются в синий цвет.

После наполнения снимают резиновую трубку со смесителя, захватывают его между большим и средним пальцами и сильно встряхивают 2-5 мин, после чего выпускают из капилляра 3 капли жидкости, а 4-й каплей заряжают счетную камеру.

Принцип метода сводится к подсчету форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) в камере Горяева. Сначала под малым увеличением микроскопа находят сетку и устанавливают равномерность распределения клеток, а затем подсчитывают их. Эритроциты считают в 5 квадратах (80 малых), расположенных по диагонали камеры Горяева. В каждом малом квадрате учитывают эритроциты, находящиеся внутри него, и те, которые касаются или лежат на его верхней и левой линиях.

Количество эритроцитов определяют по формуле

где m - общее количество клеток в 80 квадратах; γ - степень разведения крови; Х - число эритроцитов в 1 мкл.

Лейкоциты подсчитывают в 25 больших квадратах, разделенных на малые (400 малых), и определяют по формуле

где m - общее количество лейкоцитов; γ - степень разведения крови; Х - число лейкоцитов в 1 мкл; 400 - число просмотренных малых квадратов.

Выведение лейкоцитарной формулы. У рыб различают следующие виды лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, базофилы, нейтрофилы, эозинофилы (цв. табл. II). Некоторые авторы выделяют группу полиморфноядерных лейкоцитов.

Лимфоциты - небольшие клетки, немного меньше эритроцитов. Почти вся клетка заполнена ядром, цитоплазма видна в виде узкого ободка вокруг ядра. По Романовскому ядро окрашивается в фиолетово-розоватый цвет, цитоплазма - в голубоватый.

Моноциты - самые крупные клетки, ядро бобовидное, расположено эксцентрично, цитоплазма вакуолизирована, зернистость отсутствует.

Нейтрофилы - круглые клетки, имеют овальное, палочковидное или сегментированное ядро, расположенное у края клетки. В зависимости от возраста и формы ядра клетки разделяют на миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Зернистость в цитоплазме окрашивается по Романовскому - Гимзе в фиолетово-розовый цвет.

Эозинофилы - по морфологии сходны с нейтрофилами. В цитоплазме находятся крупные многочисленные зернышки розового цвета.

Базофилы отличаются наличием в цитоплазме зерен фиолетового цвета.

Высушенный и фиксированный метанолом или спирт-эфиром (1:1) мазок крови окрашивают краской Романовского - Гимза. Раствор краски предварительно разводят нейтральной дистиллированной водой (1-2 капли на 1 мл воды). Разведенную краску подслаивают под предметное стекло, положенное мазком вниз, или красят мазки в контейнерах. В зависимости от температуры воздуха и качества краски мазок окрашивают 30-60 мин. После окраски препарат быстро ополаскивают водой, высушивают на воздухе, просматривают под микроскопом с иммерсионным объективом. Обычно просчитывают 200 лейкоцитов общепринятым методом.

Определение содержания гемоглобина.

Метод Сали. В градуированную пробирку гемометра Сали до метки 2 пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирают кровь до метки 20 мкл и вносят в пробирку с соляной кислотой. Затем перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После чего в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду, перемешивают и подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках.

Количество гемоглобина крови отсчитывают по нижнему мениску на градуированной пробирке. Выражают в г%.

Фотометрический метод. Мерной пипеткой в пробирку осторожно наливают 5 мл трансформирующего раствора (бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль - 0,2, цианистый калий или натрий - 0,05 г, дистиллированная вода - до 1 л). Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови, промывая ее раствором путем попеременного вдувания и выдувания. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 20 мин в холодильнике. Затем раствор из пробирки наливают в кюветы ФЭК и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения. Расчет гемоглобина (г/л) производят по формуле Х=D540 ·367,1 г/л, где D540 - показания ФЭК; 367,1 - коэффициент перерасчета.

arktikfish.com

Проведение гематологического обследования рыб - Методическое пособие

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ Департамента ветеринарии (Минсельхозпрод России)

Заместитель руководителя РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Селиверстов В.В.

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

02.02.99 г. № 13-4-2-/1487

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по проведению гематологического обследования рыб

1. Общие положения

Необходимым условием успешного ведения интенсивного рыбоводства и воспроизводства ценных видов рыб является тщательный контроль за физиологическим состоянием объектов выращивания. Кровь, как наиболее лабильная ткань, быстро реагирует на действие различных факторов и приводит к восстановлению равновесия между организмом и средой. Поэтому для ранней диагностики заболевании, в том числе и незаразных, наряду с паразитологическими, микробиологическими и вирусологическими исследованиями важное значение имеет анализ крови.

В рыбоводстве при гематологическом исследовании принято определять следующие показатели крови:

- количество гемоглобина,

- величину гематокритного числа,

- содержание общего белка в сыворотке крови,

- число эритроцитов,

- содержание гемоглобина в одном эритроците,

- средний объем эритроцитов,

- скорость оседания эритроцитов,

- число лейкоцитов,

- лейкоцитарную формулу,

- количество метгемоглобина.

В приложении приведена таблица, содержащая показатели крови здоровых рыб, и рисунки форменных элементов крови.

2. Взятие крови

2.1. Оборудование и реактивы:

- шприц с инъекционными иглами - стерильные,

- пастеровские пипетки - стерильные,

- часовое стекло,

-5 % раствор натрия цитрата или 0,2 % раствор гепарина (1.000 ЕД/мл),

- анестстики,

- спирт,

- мардя, вата.

2.2. Материал для исследования, ход работы Кровь берут у голодной рыбы, выдержанной в хорошо аэрированной воде в течение 5-10 минут после отлова. Если это невозможно, то пойманную рыбу следует сразу помещать в ведро с водой из водоема в соотношении 1:10, содержащей релаксирующую концентрацию одного из ансстетиков: пропаксат (0,6 - 0,8 мг/л), хиналдин (25 - 30 мг/л), серный эфир (1-1,5 %) и др. Вода, в которой находится анестезированная рыба, должна постоянно аэрироваться.

В зависимости от размера объекта и необходимого количества крови кровь берут несколькими способами: из сердца, жаберной вены, хвостовой артерии, отсечением хвоста.

Место пункции после снятия чешуи обрабатывают 70 спиртом и высушивают ватньм тампоном для удаления слизи. Для взятия крови чаще используют шприц с инъекционной иглой либо пастеровскую пипетку. Инструменты предварительно обрабатывают водным раствором антикоагулянтов: цитрата натрия или гепарина. Место взятия крови нельзя сжимать во избежание попадания тканевой жидкости, искажающей результаты. Повторно брать кровь из одного и того же места не рекомендуется. Анализируемая кровь должна быть свежей, жидкой. Во избежание разрушения эритроцитов (гемолиза) кровь берут в подготовленные пробирки (или часовое стекло), сливая осторожно по стенке.

3. Приготовление и окраска мазков крови

По окрашенным мазкам крови ведут оценку активности эритропоэза и учет лейкоцитов.

3.1. Оборудование и реактивы:

- обезжиренные предметные стекла,

- шлифованное стекло для изготовления мазка,

- краска Май-Грюнвальда,

- рабочий раствор краски азур-эозина (по Романовскому),

- дистиллированная вода с рН 6,8 - 7,1, нейтрализованная фосфатными буферами.

3.2. Подготовка к исследованию

3.2.1. Подготовка предметных стекол.

- один конец стекла размером в 1-1,5 см шлифуют на наждаке для надписи простым карандашом, - стекла кипятят в 1 %-ном растворе двууглекислой соды - 10 мин, - охлаждают и промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой - 5 мин., - стекла помещают в слегка подкисленный соляной кислотой раствор дистиллированной воды на 2-3 мин; затем дважды промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе или в сушильном шкафу и хранят в смеси спирта с эфиром 1:1. Перед употреблением их вынимают, насухо вытирают чистой салфеткой или фильтровальной бумагой. Они готовы к использованию.

3.2.2. Приготовление рабочего раствора краски азур - эозина:

- 5,5 мл концентрированной краски азур - эозина помещают в 250 мл нейтральной дистиллированной воды и тщательно перемешивают.

3.3. Ход работы.

Кровь после взятия (см. п. 2.) наносят в виде небольшой капли на заранее приготовленное обезжиренное предметное стекло, на расстоянии 1,5-2 см от его шлифованного края. Большим и указательным пальцами правой руки берут шлифованное стекло за боковые ребра, ставят на предметное стекло под углом 45 и подвигают тыльной стороной к капле, которая от соприкосновения растекается. Скользящим движением продвигают шлифованное стекло вперед. Кровь должна равномерно распределяться по предметному стеклу в виде мазка. От каждой рыбы готовят не менее двух мазков. После приготовления мазка его высушивают на воздухе в течение 10-15 минут.

Подсохшие мазки без фиксации окрашивают по Паппснгсйму (Романовскому - Гимза). Первый этап - окрашивание и фиксация одновременно раствором Май-Грюнвальда в течение 5 минут, затем промывают нейтральной дистиллированной водой. Второй этап - докрашивание в рабочем растворе Романовского 30-40 минут. Качество окраски клеток контролируют под малым увеличением микроскопа. Окрашенные мазки промывают водопроводной водой и высушивают на воздухе.

4. Определение содержания ге

www.studsell.com

Кровь рыб

Кровь вместе с лимфой и межклеточной жидкостью составляет внутреннюю среду организма, т. е. среду, в которой функционируют клетки, ткани и органы. Чем стабильнее окружающая среда тем эффективнее действуют внутренние структуры организма, так как в основе их функционирования лежат биохимические процессы, контролируемые ферментными системами, которые, в свою очередь, имеют температурный оптимум и очень чувствительны к изменению рН и химического состава растворов. Контроль и поддержание постоянства внутренней среды - важнейшая функция нервной и гуморальной систем.

Гомеостаз обеспечивают многие (если не все) физиологические системы организма

рыб - органы выделения, дыхания, пищеварения, кровообращения и др. Механизм поддержания гомеостаза у рыб не так совершенен (из-за их эволюционного положения), как у теплокровных животных. Поэтому пределы изменения констант внутренней среды организма у рыб шире, чем у теплокровных животных. Следует подчеркнуть, что кровь рыб имеет существенные физико-химические отличия. Общее количество крови в организме у рыб меньше, чем у теплокровных животных. Оно варьирует в зависимости от условий жизни, физиологического состояния, видовой принадлежности, возраста. Количество крови у костистых рыб составляет в среднем 2-3 % массы их тела. У малоподвижных видов рыб крови не более 2 %, у активных - до 5 %.

В общем объеме жидкостей тела рыб кровь занимает незначительную долю, что видно на примере миноги и карпа (табл. 6.1).

6.1. Распределение жидкости в организме рыб, %

Вид рыб

Общее количество жидкости

Внутриклеточная жидкость

Внеклеточная жидкость

Кровь

Минога

76

52

24

8,5

Карп (+)

80

-

25

4,0

Карп (1+)

71

56

15

3,0

Как и у других животных, кровь у рыб делится на циркулирующую и депонируемую. Роль депо крови у них выполняют почки печень, селезенка, жабры и мышцы. Распределение крови по отдельным органам неодинаково. Так, например, в почках кровь составляет 60% массы органа, в жабрах -57, в сердечной ткани - 30, в красных мышцах - 18, в печени - 14 %. Доля крови в процентах от всего объема крови в организме рыб высока в почтах и сосудах (до 60 %), белых мышцах (16 %), жабрах (8 %), красных мышцах(6 %).

Физико-химические характеристики крови рыб

Кровь рыб имеет ярко-красный цвет, маслянистую на ощупь консистенцию, солоноватый вкус, специфический запах рыбьего жира.

Осмотическое давление крови костистых пресноводных 6 - 7 атм, температура замерзания минус 0,5 "С. рН крови рыб колеблется от 7,5 до 7,7 (табл. 6.2).

6.2. рН крови у разных видов рыб

Вид рыб

рН

Вид рыб

рН

Стерлядь

7,5

Пескарь, ерш

7,7

Карп, карась

7,6

Плотва, голавль

7,7

Наибольшую опасность представляют кислые метаболиты. Для характеристики защитных свойств крови по отношению к кислым метоболитам используют щелочной резервуар (запас бикарбонатов плазмы).

Щелочной резерв крови рыб разными авторами оценивается в 5-25см/100мл. Для стабилизации рН крови у рыб существуют те же самые буферные механизмы, что и у высших позвоночных. Самой эффективной буферной системой является система гемоглобина, на долю которой приходится 70-75 % буферной емкости крови. Далее по функциональным возможностям следует карбонатная система (20- 25%). Активируется карбонатная система не только (а возможно и не столько) эритроцитарной карбоангидразой, но и карбоангидразой слизистой жаберного аппарата и других специфических органов дыхания. Роль фосфатной и буферной систем белков плазмы менее значительна, так как концентрация компонентов крови, из которых они состоят, может изменяться у одной и той же особи в широких пределах (в 3-5 раз).

Осмотическое давление крови имеет также широкие пределы колебаний, поэтому состав изотонических растворов для разных видов рыб неодинаков (табл. 6.3).

6.3. Изотонические растворы для рыб (NaCI, %)

Вид рыб

Концентрация NaCI, %

Вид рыб

Концентрация NaCI, %

Белый амур, толстолобик, севрюга

0,60

Линь

0,83

Серебряный карась

0,65

Угорь

1,03

Карп, сазан, щука

0,75

Скаты

2,00

Скумбрия, морской петух

0,75 + 0,2% Мочевина

 

Различия ионного состава плазмы крови диктуют особый подход к приготовлению физиологических растворов для манипуляций с кровью и другими тканями и органами in vitro. Приготовление физиологического раствора предполагает использование не большого количества солей. Его состав, а также физико- химические свойства приближены к таковым морской воды (табл. 6.4).  

6.4. Состав физиологических растворов, %

Вид рыб

NaCl

KCI

CaCl2

MgSО4

Пресноводные (в среднем)

7,5

0,2

0,2

-

Лососевые

6,42

0,15

0,22

0,12

Морские костистые

7,8

0,18

0,17

-

Пластинчатожаберные

16,4

0,9

1,1

-

Толерантность рыб к изменению солевого состава окружающей среды в значительной мере зависит от возможностей клеточных мембран. Эластичность и избирательную проницаемость мембран характеризует показатель осмотической резистентности эритроцитов.

Осмотическая резистентность эритроцитов рыб имеет большую изменчивость в пределах класса. Она также зависит от возраста, сезона года, физиологического состояния рыб. В группе teleosts она оценивается в среднем 0,3-0,4 % NaCl. Существенным изменениям подвержен и такой жесткий у теплокровных животных показатель, как содержание белков в плазме крови. Для рыб допустимо пятикратное изменение концентрации плазменных белков (альбуминов и глобулинов), что абсолютно несовместимо с жизнью у птиц и млекопитающих.

В благоприятные периоды жизни содержание плазменных белков в крови рыб выше, чем после их голодания, зимовки, нереста, а также болезней. Так, например, у форели оно в среднем составляет 6-7%, у сеголетков карпа - 2-3 %, у более старших рыб-5-6%. В целом отмечается увеличение концентрации плазменных белков с возрастом рыб, а также в течение вегетационного периода. Например, у сазана в двухмесячном возрасте она составляет ] ,5 %, в годовалом возрасте - 3 %, в 30- месячном возрасте - 4 %-. а у производителей в конце нагульного периода - 5-6 %. Возможны также и половые различия (0,5-1,0 %).

Спектр белков плазмы представлен типичными группами, т.е. альбуминами и глобулинами, однако как физиологическая норма, у рыб в плазме обнаруживаются и другие белки - гемоглобин, гептоглобин. Например, из плазмы крови арктических видов рыб выделили группу гликопротеидов. играющих роль антифризов, т. е. веществ, препятствующих кристаллизации клеточной и тканевой воды и разрушению мембран.

Естественно, при такой динамике белкового состава плазмы можно ожидать и непостоянства соотношения альбуминов и глобулинов крови, например, в процессе роста рыбы (табл. 6.5).

6.5. Онтогенетические изменения белкового спектра сыворотки крови карпа, %

Возраст рыбы

Общий белок

Альбумины (А)

Глобулины (Г)*

Соотношение: А/Г

Сеголетки

4,2

47,5

13/31/9

0,9

Двухлетки

3,9

41,4

13/38/8

0,7

Производители(5- 6-летки): самки

5,9

33,7

12/36/18

0,5

самцы

4,2

49,7

18/20/14

1,0

* фракции: альфа/бета/гамма.

Заметно изменяется фракционный состав белков плазмы и в течение вегетационного периода. Так, например, у сеголетков карпа различия в содержании белка к осени достигают 100 % по отношению к моменту посадки в выростные пруды (табл. 6.6). Содержание в крови молоди карпа альбуминов и бета-глобулинов находится в прямой зависимости от температуры воды. Кроме того, гипоксия, плохая кормовая база в водоемах также приводят к снижению обеспеченности организма рыбы альфа- и бета-глобулинами.

В хороших условиях при обильном питании отмечают рост концентрации сывороточного белка за счет альбуминовой фракции, В конечном счете обеспеченность рыбы альбуминами (г/кг живой массы) качественно и количественно характеризует питание рыбы, по крайней мере, в периоды ее интенсивного роста. По обеспеченности организма рыбы альбуминами можно составить прогноз на выход сеголетков из предстоящей зимовки.

6.6. Белковый состав сыворотки крови сеголетков карпа в зависимости от сезона года, %

 

Показатели

Июль

Октябрь(т - 30 г)

Концентрация общая

2,6

5,0

Альбумины

41,0

45,0

Глобулины: альфа

25,0

28,0

бета

30,0

23,0

гамма

4,0

4,0

Например, в водоемах Московской области хорошие результаты выращивания сеголетков и максимальный выход годовиков после зимовки (80-90 %) отмечены у рыб с общим количеством белка в плазме крови около 5 % и содержанием альбуминов около 6 г/кг живой массы. Особи с количеством белка в сыворотке крови до 3,5 % и содержанием альбуминов 0,4 г/кг живой массы и чаще погибали в процессе роста (выход сеголетков менее70%) и тяжелее переносили зимовку (выход годовиков менее 50%)

Очевидно, что альбумины плазмы крови рыб выполняют функцию резерва пластического и энергетического материалов, который используется организмом в условиях вынужденного голодания. Высокая обеспеченность организма альбуминами и гамма-глобулинами создает благоприятные предпосылки для оптимизации обменных процессов и гарантирует высокую неспецифическую резистентность,

Клетки крови рыб

Морфологическая картина крови рыб имеет яркую классовую и видовую специфичность. Зрелые эритроциты у рыб крупнее, чему теплокровных животных, имеют овальную форму и содержат ядро (рис. 6.1 и 6.3). Наличием ядра специалисты объясняют большую продолжительность жизни красных клеток (до года), поскольку наличие ядра предполагает повышенную способность клеточной мембраны и цитозольных структур к реставрации.

Вместе с тем наличие ядра ограничивает способность эритроцита связывать кислород и адсорбировать на своей поверхности различные вещества. Однако отсутствие эритроцитов в крови личинок угря, многих арктических и антарктических рыб свидетельствует о том, что функции эритроцитов у рыб дублируются другими структурами.

Гемоглобин рыб по своим физико-химическим свойствам отличается от гемоглобина других позвоночных. При кристаллизации он дает специфическую картину (рис. 6.2).

Количество эритроцитов в крови рыб в 5-10 раз меньше, чем в крови млекопитающих. У пресноводных костистых рыб их в 2 раза меньше чем, в крови морских рыб. Однако даже внутри одного вида возможны многократные изменения, которые могут быть вызваны факторами внешней среды и физиологическим состоянием рыбы.

Анализ табл. 6.7 показывает, что зимовка рыб оказывает существенное влияние на характеристику красной крови. Общее количество гемоглобина за зиму может снизиться на 20 %. Однако при пересадке годовиков в нагульные пруды эритропоэз настолько активизируется, что показатели красной крови восстанав-ливаются до осеннего уровня за 10-15 дней нагула. В это время в крови рыб можно наблюдать повышенное содержание незрелых форм всех клеток.

6.7. Характеристики красной крови сеголетков и годовиков карпа

Hb, %

Гематокрит, %

Количество эритроцитов, млн

НЬ в одном эритроците, мг%

Объем эритроцита, мкм

10,8*

35,8*

1,24*

86/32*

292*

9 7**

32,8**

1,20**

86/32**

274**

* Сеголетки (октябрь). ** Годовики (май).

Клетки крови осетра

Рис. 6.1. Клетки крови осетра:

1-гемоцитобласт; 2- миелобласт; 3- эритробласт; 4- эритроциты; 5- лимфоциты; 6- моноцит; 7- нейтрофильный миелоцит; 8- сегментоядерный эозинофил; 9- монобласт; 10- промиелоцит; 11 - базофильный нормобласт; 12- полихроматофильный нормобласт; 13- лимфобласт; 14- эозинофильный метамиелоцит; 15- палочкоядерный эозинофил; 16- профильный метамиелопит; 17- палочкоядерный кейтрофил; 18- сегментоядерный нейтрофил; 19 - тромбоциты; 20- эозинофильный миелоцит; 21 - клетки с вакуолизированной цитоплазмой

Характеристика красной крови зависит от факторов внешней среды. Обеспеченность рыбы гемоглобином определяется температурой воды. Выращивание рыбы в условиях пониженного содержания кислорода сопровождается увеличением общего объема крови, плазмы, что повышает эффективность газообмена.

Характерной особенностью рыб является полиморфизм красных - одновременное присутствие в кровяном русле эритроцитных клеток различной степени зрелости (табл. 6.8).

6.8. Эритроцитарный ряд форели (%)

Длина рыбы, см

Незрелые формы эритроцитов

Зрелые эритроциты
эритробласт нормобласт базофильный полихромофильный

4,2

1,5

4,1

11,8

19,5

63,1

7,6

0

4,4

5,7

15,3

74,6

18,2

0

2,2

7,7

12,3

77,8

Увеличение количества незрелых форм эритроцитов связано с сезонным усилением обмена веществ, кровопотерями, а также с возрастными и половыми особенностями рыб. Так, у производителей наблюдается 2-3-кратное увеличение незрелых эритроцитов по мере созревания гонад, достигающее 15 % у самцов перед нерестом. В эволюции красных клеток крови рыб выделяют три этапа, каждый из которых характеризуется образованием морфологически довольно самостоятельных клеток - эритробласта, нормобластов и собственно эритроцита.

Эритробласт является самой незрелой клеткой эритроидного ряда. Эритробласты рыб можно отнести к средним и крупным клеткам крови, так как их размеры составляют от 9 до 14 мкм. Ядро этих клеток имеет красно-фиолетовый цвет (в мазке). Хроматин равномерно распределяется по ядру, образуя сетчатую структуру. При большом увеличении в ядре можно обнаружить от 2 до 4 ядрышек. Цитоплазма этих клеток резко базофильна. Она образует сравнительно правильное кольцо вокруг ядра.

Базофильный нормобласт образуется из эритробласта. Эта клетка имеет более плотное ядро меньшего размера, которое занимает Центральную часть клетки. Цитоплазма характеризуется слабовыраженными базофильными свойствами. Полихроматофилъный нормобласт отличается еще меньшим, с резко очерченными краями ядром, которое несколько смещается от центра клетки. Другой его особенностью является то, что ядерный хроматин располагается радиально, образуя довольно правильные сектора в пределах ядра. Цитоплазма клеток в мазке имеет не базофильное, а грязно-розовое (светло-сиреневое) окрашивание.

Кристаллы гемоглобина рыб

Рис. 6.2. Кристаллы гемоглобина рыб

Оксифильный нормобласт имеет округлую форму с центрально расположенным округлым и плотным ядром. Цитоплазма располагается широким кольцом вокруг ядра и имеет хорошо различимую розовую окраску.

Эритроциты рыб завершают эритроидный ряд. Они имеют овальную форму с повторяющим их форму плотным ядром красно-фиолетового цвета. Хроматин образует скопления в виде специфических глыбок. В целом зрелый эритроцит похож на оксифильный нормобласт как по характеру окраски ядра- и цитоплазмы в мазке, так и по микроструктуре протоплазмы. Его отличает лишь вытянутая форма. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) у рыб в норме составляет 2-10 мм/ч. Белые клетки крови (лейкоциты). Лейкоциты крови рыб представлены в большем количестве, чем таковые у млекопитающих. Для рыб характерен лимфоцитарный профиль, т. е. более 90 % белых клеток составляют лимфоциты (табл. 6.9, 6.10).

6.9. Количество лейкоцитов в 1 мм

 

Вид рыб Количество клеток, тыс/мм2 Вид рыб Количество клеток, тыс/мм2

Форель

25

Щука

30-110

сеголетки

50-80

Осетр

15-30

годовики

80-160

Толстолобик

60-100

двухлетки

30-120

трехлетки

60-90

6.10. Лейкоцитарная формула, %

Вид и масса рыб, г

Лимфоциты

Моноциты

ПМЯ клетки

Эозинофилы

Нейтрофилы

Карп:

0,26

96

4

0,1

-

-

25

93

5

2

0,1

0,1

500

95

4

1

-

-

1000

96

3

0,1

-

-

Форель:

20

91

5

3

1

1

150

99

1

0,3

-

-

800

98

2

0,5

-

-

Толстолобик 100

90

4

1

5

4,5

Фагоцитирующими формами являются моноциты и полиморфноядерные клетки. На протяжении жизненного цикла лейкоцитарная формула меняется под влиянием факторов внешней среды. Во время нереста снижается количество лимфоцитов в пользу моноцитов и полиморфноядерных клеток.

В крови рыб присутствуют полиморфноядерные клетки (гранулоциты), находящиеся на разных стадиях зрелости. Родоначальником всех гранулоцитов следует рассматривать миелобласт (рис. 6.3).

Клетки крови рыбы

Рис. 6.3. Клетки крови карася:

1 - гемоцитобласт; 2- миелобласт; 3 - эритробласт; 4-эритроциты; 5 - лимфоциты; 6- моноцит; 7- нейтрофильный миелоцит; 8- псевдоэозинофильный миелоцит; 9- монобласт; 10- промиелоцит; 11 - базофильный нормобласт; 12 -- полихроматофильный нормобласт; 13 - лимфобласт; 14- нейтрофильный метамиелоиит; 15- псевдоэозинофильный метамиелоцит; 16- палочколдерный нейтрофил; 17 - сегментоядерный нейтрофил; 18- псевдобазофил; 19- тромбоцит Эта клетка отличается крупными размерами и большим ядром красно-фиолетового цвета, которое занимает большую ее часть. Размеры миелобластов колеблются от 12 до 20 мкм. Микроструктура клеток характеризуется обилием рибосом, митохондрий, а также интенсивным развитием комплекса Гольджи. При созревании миелобласт переходит в промиелоцит.

Промиелоцит сохраняет размеры своей предшественницы, т.е. является крупной клеткой. По сравнению с миелобластом промиелоцит имеет более плотное ядро красно-фиолетового цвета с 2-4 ядрышками и слабобазофильную цитоплазму зернистой структуры. Кроме того, в этой клетке меньше рибосом. Миелоцит мельче предыдущих клеток (10-15 мкм). Плотное круглое ядро утрачивает ядрышки. Цитоплазма занимает больший объем, имеет ярко выраженную зернистость, которая выявляется кислыми, нейтральными и основными красителями.

Метамиелоцит отличается ядром вытянутой формы с пятнистым хроматином. Цитоплазма клеток имеет неоднородную гранулярную структуру. Палочкоядерный гранулоцит представляет собой дальнейший этап эволюции гранулоиитов. Отличительным признаком его является форма плотного ядра. Оно у него вытянутое, с обязательным перехватом. К тому же ядро занимает меньшую часть объема клетки.

Сегментоядерный гранулоцит представляет конечную стадию созревания миелобласта, т.е. является наиболее зрелой клеткой гранулярного ряда крови рыб. Его отличительной особенностью является сегментированное ядро. В зависимости

от того, какой краской окрашиваются гранулы цитоплазмы, сегментоядерные клетки дополнительно классифицируют на нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, а также на псевдоэозинофилы и псевдобазофилы. Некоторые исследователи отрицают наличие базофильных форм гранулоцитов у осетровых рыб.

Полиморфизм клеток отмечается и у лимфоцитов крови рыб. Наименее зрелой клеткой лимфоидного ряда считают лимфобласт, формирующийся из гемоцитобласта.

Лимфобласт отличается крупным округлым ядром красно-фиолетового цвета с сетчатой структурой хроматина. На долю цитоплазмы приходится узкая полоска, окрашиваемая основными красителями. При изучении клетки под большим увеличением обнаруживается много рибосом и митохондрий на фоне слабого развития комплекса Гольджи и эндоплазматического ретикулума. Пролимфоцит представляет собой промежуточную стадию развития клеток лимфоидного ряда. От предшественника пролимфоцит отличается структурой хроматина в ядре: он утрачивает сетчатое строение.

Лимфоцит имеет красно-фиолетовое ядро различной формы (округлое, овальное, палочковидное, дольчатое), которое располагается в клетке асимметрично. Хроматин распределен в пределах ядра неравномерно. Поэтому на окрашенных препаратах в пределах ядра видны облаковидные структуры. Цитоплазма располагается асимметрично относительно ядра и часто образует псевдоподии, что придает клетке амебовидную форму.

Лимфоцит рыб - мелкая клетка (5-10 мкм). При микроскопировании мазков крови лимфоциты можно спутать с другими мелкими клетками крови- тромбоцитами. При их распознавании следует учитывать различия в форме клеток, ядра и границ распределения цитоплазмы вокруг ядра. К тому же и окрашенность цитоплазмы у этих клеток неодинакова: у лимфоцитов она синяя, у тромбоцитов -- розовая. В свою очередь, лимфоциты крови - неоднородная группа клеток, различающихся по морфофункциональным признакам. Здесь довольно упомянуть о том, что выделяют Т- и В-лимфоциты, которые имеют неодинаковое происхождение и свои собственные уникальные функции в реакциях клеточного и гуморального иммунитета.

Моноцитоидный ряд белой крови рыб представляют, по крайней мере, три типа довольно крупных (11 - 17 мкм) клеток.

Монобласт является наименее зрелой клеткой этого ряда. Он выделяется крупным ядром красно-фиолетового цвета неправильной формы: бобовидной, подковообразной, серповидной. Клетки имеют широкий слой цитоплазмы со слабобазофильными свойствами.

Промоноцит отличается от монобласта более рыхлой структурой ядра и хроматином дымчатого вида (после окрашивания). Неравномерно окрашивается и цитоплазма этих клеток, отчего приобретает дымчатость.

Моноцит - наиболее зрелая клетка ряда. Имеет крупное ядро красно-фиолетового цвета с относительно небольшим количеством хроматинового вещества. Форма ядра чаще неправильная. На окрашенных препаратах цитоплазма сохраняет дымчатость. Ухудшение условий содержания рыбы (гипоксия, бактериальная и химическая загрязненность водоема, голодание) приводит к увеличению фагоцитирующих форм. В процессе зимовки карпа отмечают 2-16-кратный рост количества моноцитов и полиморфноядерных клеток при одновременном уменьшении на 10-30 % количества лимфоцитов. Таким образом, за физиологическую норму следует принимать показатели рыб, выращенных в хороших условиях. Тромбоциты крови рыб. Нет более противоречивой информации о морфологии и происхождении клеток крови, чем сведения о тромбоцитах рыб. Отдельными авторами существование этих клеток вообще отрицается. Однако более убедительной выглядит точка зрения о большом морфологическом разнообразии и высокой изменчивости тромбоцитов в организме рыб. Не последнее место в этом споре занимают особенности методических приемов при исследовании тромбоцитов.

В мазках крови, сделанных без применения антикоагулянтов, многие исследователи обнаруживают, как минимум, четыре морфологические формы тромбоцитов - шиловидную, веретенообразную, овальную и округлую. Овальные тромбоциты внешне практически неотличимы от мелких лимфоцитов. Поэтому при подсчете тромбоцитов в мазке крови их количественная характеристика в 4 %, вероятно, занижается при использовании данной методики.

Известна и другая крайность. Некоторые авторы 82-95 % окрашенных по Романовскому клеток причисляют к тромбоцитам.

Более совершенные методы, например иммунофлюоресцентный со стабилизацией крови гепарином, позволили определить соотношение лимфоциты: тромбоциты как 1 : 3. Концентрация тромбоцитов в 1 мм3 при этом составила 360 000 клеток. Остается открытым вопрос о происхождении тромбоцитов у рыб. Распространенная точка зрения о едином с лимфоцитами происхождении из мелких лимфоидных гемобластов в последнее время подвергается сомнению. Ткань, производящая тромбоциты, у рыб не описана. Однако обращает на себя внимание то, что в отпечатках от срезов селезенки практически всегда обнаруживается большое количество овальных клеток, сильно напоминающих овальные формы тромбоцитов. Следовательно, есть основания полагать, что тромбоциты рыб образуются в селезенке.

Таким образом, можно определенно говорить о существовании тромбоцитов в классе рыб de facto, отметив при этом их большое морфологическое и функциональное разнообразие.

Количественная характеристика этой группы клеток не отличается от таковой у других классов животных.

Среди исследователей крови рыб существует единая точка зрения относительно функциональной значимости тромбоцитов. Подобно тромбоцитам других классов животных у рыб они осуществляют процесс свертывания крови. У рыб время свертывания крови - довольно нестабильный показатель, который зависит не только от способа взятия крови, но и от факторов внешней среды, физиологического состояния рыбы (табл. 6.11).

6.11. Время свертывания крови в зависимости от способа получения крови (на примере форели)

Способ взятия крови

Время свертывания, с

Пункция аорты

150-250

Пункция желудочка сердца или хвостовых сосудов

50-150

Каудоэктомия

20-60

Стресс-факторы повышают скорость свертывания крови у рыб, что свидетельствует о значительном влиянии центральной Нервной системы на этот процесс (табл. 6.12).

6.12. Влияние стресса на время свертывания крови у форели, с

До стресса

175

Через 30 мин

105

Через 1 мин

135

Через 60 мин

130

Через 20 мин

105

Через 180 мин

160

Данные табл. 6.12 свидетельствуют о том, что реакция адаптации у рыб включает в себя механизм защиты организма от кровопотерь. Первый этап свертывания крови, т. е. образование тромбопластина, контролируется гипоталамо-гипофизарной системой и адреналином. Кортизол, вероятно, не затрагивает этот процесс. В литературе описаны и межвидовые различия свертывания крови у рыб (табл. 6.13). Однако к этим данным следует относиться с определенным скептицизмом, помня о том, что отловленная рыба - это рыба, подвергнутая резкому стрессу. Поэтому межвидовые различия, описанные в специальной литературе, вполне могут оказаться результатом различной устойчивости рыб к стрессам.

6.13. Время свертывания крови у разных видов рыб, с

Вид рыб

Время свертывания крови, с

Условия

Карп, лещ, густера

600-840

Выловлены из природных водоемов

Плотва, язь

300-380

То же

Ерш, окунь, судак

120-180

То же

Радужная форель

150-250

Выловлена из искусственных бассейнов

Таким образом, организм рыб надежно защищен от больших кровопотерь. Зависимость времени свертывания крови рыб от состояния нервной системы является дополнительным защитным фактором, поскольку крупные кровопотери возможны скорее всего в стрессовых ситуациях (нападение хищника, драки).

biofile.ru

Методики проведения диагностики рыб | Акваловер

Некоторые практические советы проведения вскрытия рыб, различных лабораторных исследований организма рыбы и отдельных органов помогут аквариумисту в постановке диагноза.

При гистологических исследованиях мальков или мелких рыб вскрывают брюшную полость и заносят рыб в фиксирующий материал целиком. У крупных рыб необходимо взять органы, либо части органов размером 2хЗх1 см. Материал для гистологического исследования можно брать и при патологоанатомическом исследовании рыбы.Исследуемый материал фиксируют в стеклянных банках с широким горлом, в 10%-ном формалине или в 70 — 96%-м спирте.

При вскрытии рыбы (патологоанатомическом исследовании) важно не повредить внутренние органы.У исследуемой рыбы сначала осматривают брюшную полость. Важно отмечать наличие в ней газов, жидкостей различного происхождения (транссудат, экссудат и др.), спаек, опухолей; в состоянии внутренних органов: изменение их окраски и размеров, наличие цист паразитов, личинок гельминтов, спаек и сращений.  Осматривают брюшину: она должна быть гладкой, блестящей. При патологических процессах в ней измененяется окраска, наблюдаются кровоизлияния, паразитарные бугорки, туберкулы.Внутренние органы достают из брюшной полости, с предосторожностями отделяют друг от друга и исследуют в следующем порядке: печень, желчный пузырь, селезёнка, желудочно-кишечный тракт, половые железы, плавательный пузырь, почки, мочевой пузырь, сердце. При этом сначала извлекают печень и жир, а затем вскрывают желудочно-кишечный тракт ножницами, а также извлекают глаза и вскрывают черепную коробку, осматривая головной мозг.  Кишечник промывают в воде и внимательно осматривают слизистую оболочку: отмечают набухание, истончение, кровоизлияния, наложения, язвы, цвет.

Головной и спинной мозг просматривают под микроскопом (после вскрытия и удаления жира) и компрессионным способом (раздавив между предметными стеклами) под лупой (мозг фиксируют в 10% -ном растворе нейтрального формалина, с добавлением сухого мела или углекислой магнезии: до 1/10-1/20 объема формалина). Обращают внимание на гиперемию, кровоизлияния, консистенцию мозгового вещества. Таким же образом просматривают и внутреннюю поверхность кожи и мускулатуру.

Поражённые органы (кусочки органов) помещают в емкости с фиксирующим раствором (70-96%-й этиловый спирт или 10-15%-й формалин), с этикеткой, обозначающей вид и возраст рыбы, название органа, дату помещения органа в сосуд.

 

Исследование рыбы

При вирусологическом исследовании кусочки пораженных органов и тканей должны быть весом не более 3-5 г, их фиксируют в 50% -ном растворе глицерина, в соотношении 1:5-1:10 или замораживают. Применяют химически чистый глицерин, разведенный  с физиологическим раствором в пропорции 50/50 и стерилизованный в автоклаве при температуре 120 °С в течение 30 минут (рН = 7,2-7,4).

При проведении паразитологического исследования рыбы берут кровь из сердца или хвостовой артерии, делают мазок на предметном стекле, который затем окрашивают и просматривают под микроскопом для обнаружения кровепаразитов.Вырезают и изучают жабры, извлекают для анализа слизь из носовых полостей. Внутренние органы вскрывают и осматривают как и при патологоанатомическом исследовании (но при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать стерильность):Методика осмотра печени, селезенок и почек следующая: органы осматривают невооружённым глазом и собирают крупных паразитов, капсулы с личинками, цисты с миксоспоридиями. Обращают внимание на форму, величину, цвет, консистенцию (плотная, мягкая, дряблая), гиперемию или анемию, кровоизлияния, наличие туберкул и цист. Далее орган или небольшой кусочек органа зажимают между стёклами и просматривают под микроскопом, для обнаружения мелких паразитов. Таким же способом, сдавливая между двумя стеклами, просматривают и яичники, и семенники.У желчного и мочевого пузырей очень внимательно изучают их содержимое: цвет, консистенция, прозрачность. У плавательного пузыря исследуют стенки. Обращают внимание на наличие кровоизлияний.Желудочно-кишечный тракт, после полного извлечения,  распрямляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. Крупных паразитов (обычно гельминтов) извлекают, промывают в физиологическом растворе или воде, а затем фиксируют. Делают соскоб со слизистой оболочки желудка, кишечника и исследуют под микроскопом.Глаза полностью извлекают из глазниц, разрезают и изучают хрусталик и стекловидное тело, раздавив их между предметными стёклами.

Материал, приготовленный для паразитологического исследования, фиксируется различными способами, и обязательно сопровождается этикеткой, указывающей вид рыбы, ее возраст, дату забора.

При токсикологических исследованиях берут пробы воды:  не менее 1 л;  грунта: не менее 1 кг;  бентоса, фиксированные в 70%-ном спирте: не менее 100-150 г живой массы. Все пробы, с указанием места и даты забора, отправляются в лаборатории, проводящие анализы по данному направлению.

Строение рыбы

При гематологическом исследовании рыбы, кровь необходимо брать у голодной, выдержанной в хорошо аэрированной воде, рыбы.Кровь можно брать несколькими способами: из сердца, жаберной вены, хвостовой артерии, отсечением хвоста.С рыбы соскабливают чешую и обрабатывают 70° спиртом место забора крови, а затем высушивают ватным тампоном для удаления слизи. Для взятия крови обычно используют шприц с инъекционной иглой, либо пастеровскую пипетку. Инструменты предварительно обрабатывают водным раствором антикоагулянтов: цитрата натрия или гепарина.При взятии крови нельзя давить на мускулатуру во избежание попадания тканевой жидкости, искажающей результаты. Нежелательно повторно брать кровь из одного и того же места.Взятую у рыбы кровь помещают в специальные колбы или в пастеровские пипетки и отправляют в лабораторию на исследование. При транспортировке летом, от момента взятия анализа крови до начала его исследования должно пройти не более 1-2 часов.

При транспортировке в лабораторию материала для микробиологического исследования, кусочки органов и тканей помещают в герметичные, стеклянные колбы, банки, пробирки, с наклеенными этикетками и закрытые пробками и перевозят.

Метод прижизненной диагностики болезней рыб позволяет сохранить гидробионтам жизнь и точно диагностировать заболевание.

sdfgsdg666

www.aqualover.ru

Ихтиогематологические показатели как критерий условий выращивания и обитания рыб + "

Автореферат диссертации по теме "Ихтиогематологические показатели как критерий условий выращивания и обитания рыб"

[си

005003871

Сементина Евгения Владимировна

ИХТИОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КАК КРИТЕРИИ УСЛОВИЙ ВЫРАЩИВАНИЯ И ОБИТАНИЯ РЫБ

03.02.06 Ихтиология

- 3 ЛЕН 2011

Автореферат диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Калининград - 2011

005003871

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджеты^ образовательном учреждении высшего профессионального образовали «Калининградский государственный технический университет» (ФГБОУ ВП «КГТУ»)

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор Серпунин Геннадий Георгиевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Аминева Виктория Александровна

доктор биологических наук Ковачева Николина Петкова

Ведущая организация

ФГУП Атлантический научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП «АтлантНИРО»)

Защита состоится 28.12.2011г. в 1600ч на заседании диссертационного совет Д 307.007.01 при Федеральном государственном бюджетном образовательном учрея дении высшего профессионачьного образования «Калининградский государственны технический университет», по адресу: 236022 г. Калининград, Советский проспект, ауд. 255.

Факс: 8 (4012) 91-68-4С

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВП1 «Калининградский государственный технический университет»

Автореферат разослан 25.11.2011г.

Учёный секретарь диссертационного совета

доктор технических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. С переходом рыбоводства на промышленную основу приобрела актуальность проблема оценки воздействия на рыб неблагоприятных условий выращивания [Матишов, Пономарева, Балыкин, 2008]. Диагностика физиологического состояния объектов выращивания основана на обнаружении в их организме различных изменений, в том числе и гематологических. Многие вопросы реакций организма осетровых видов рыб, выращиваемых в УЗВ, на внешние изменения ещё не достаточно изучены, поэтому необходимо исследовать динамику показателей крови с учетом основных факторов окружающей их среды [Серпунин, 2010]. В литературе практически отсутствуют данные о характере изменения гематологических показателей и физиологического состояния осетровых рыб при использовании в их рационе пробитика «Субтилис» - активного иммуностимурятора организма рыб. Изучение этого вопроса является весьма важным для выяснения механизма действия пробиоти-ка на гематологические параметры рыб и определения возможности использования характеристики крови в качестве индикатора при разработке профилактических и оздоровительных мероприятий.

К настоящему времени антропогенные факторы глобально изменили и продолжают изменять условия существования рыб. Происходящее загрязнение рек и озёр влечёт за собой резкое сокращение их численности, путём разрушения экосистем [Стерлигова, Савосин, Ильмаст, 2010]. Не является исключением и озеро Виштынец-кое - древнейший и уникальный для Калининградской области водоём, который имеет особый природоохранный статус. С ростом числа отдыхающих на берегу озера усиливается процесс эвтрофирования. В последствии этот водоём может перейти из низкого уровня трофности в более высокий [Озеро Виштынецкое, 2008; Тылик, 2007]. В создавшейся ситуации изучение жизнеобеспечивающих систем приобрело особую актуальность и представляет не только научную, но и практическую ценность. Изучение крови окуня и сига озера Виштынецкого позволит определить их адаптационные возможности в условиях конкретного водоёма, а картину крови можно будет использовать в дальнейшем в качестве эталона эколого-физиологического состояния рыб в период активного антропогенного воздействия на озеро Виштынецкое.

Цель и задачи работы. Цель работы - оценить по гематологическим показателям рыб условия их выращивания в УЗВ и экологическое состояние озера Виштынецкого.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи: 1) определить связь гематологических показателей стерляди, выращиваемой в УЗВ, с температурой и гидрохимическими параметрами;

2) определить влияние пробиотического препарата «Субтилис» на рыбовод, биологические и гематологические показатели стерляди разных возрастных групп;

3) оценить условия выращивания стерляди разных возрастных групп в У2 предприятия ООО «КМП Аква», используя в качестве критерия её гематологическ показатели, установленные прижизненно;

4) установить современный гематологический статус окуня и сига озера Вишт] нецкого в различные сезоны года;

5) оценить экологическое состояние озера Виштынецкого по гематологическ! показателям окуня и сига.

Научная новизна и теоретическое значение работы. Впервые установлен I матологический статус стерляди и сига по 27-ми параметрам крози, включая восе! цитометрических параметров эритроцитов, определенных автоматически с использ ванием системы анализа изображений «Видео-Тест-Морфо». Впервые определе] влияние пробиотического препарата «Субтилис» на гематологические показате: стерляди разного возраста при выращивании в УЗВ. Установлены наиболее чувств тельные к пробиотику параметры крови, которые могут служить индикаторами п] разработке новых пробиотических препаратов. Установлены достоверные коррел ционные связи гематологических показателей стерляди с температурой воды и гидр химическими параметрами. Новые данные по гематологическим параметрам кро: стерляди могут служить теоретической основой для разработки вопросов оптими: ции условий выращивания и контроля физиологического состояния рыб в аквакул туре.

Впервые установлен гематолог:веский статус окуня и сига озера Виштынецко! уровень параметров крови этих рыб в различных районах озера, их межвидовые рг личия и дана оценка экологического состояния озера Виштынецкого в различные с зоны 2008-2009 гг. по ихтиогематологическим показателям.

Практическое значение работы. Показана целесообразность применения п кормлении стерляди разного возраста пробиотического препарата «Субтилис» д повышения её резистентности при индустриальном выращивании. Результаты ггр шли апробацию на предприятии ООО «КМП Аква» при формировании ремонта маточного стада стерляди. Создана электронная база гематологических показател окуня и сига озера Виштынецкого. Впервые установленные показатели крови раз* возрастных групп окуня и сига озера Виштынецкого могут быть использованы дальнейших исследованиях крови этих видов рыб, а также в качестве индикатор при оценке загрязнения озера Виштынецкого в период активного антропогенно

воздействия. Материалы диссертации могут быть использованы для повышения эффективности рыбоводства и биологического мониторинга естественных водоемов.

Основные положения, выдвигаемые для публичной защиты:

1) гематологические показатели стерляди разного возраста, выращиваемой в УЗВ, могут быть определены прижизненно, свидетельствуют о высокой чувствительности системы крови к изменению различных факторов среды, что позволяет использовать их в качестве критерия для оценки условий выращивания без ущерба для рентабельности рыбоводного предприятия;

2) добавление в корм пробиотического препарата «Субтилис» положительно влияет на гематологические показатели стерляди, стабилизирует их и ослабляет связь с температурой воды и гидрохимическими параметрами;

3) состояние системы крови окуня и сига озера Виштынецкого свидетельствует о благоприятной экологической обстановке в северном, центральном, западном и южном районах озера.

Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на заседаниях и научно-методических семинарах кафедры аквакультуры ФГБОУ ВПО «КГТУ» (2008-2011 гг.), на Международных научных конференциях в 2009-2011 гг.

Декларация личного участия. Автор лично участвовал в сборе, обработке и анализе материала в 2008-2011 гг.; сформулировал цель и задачи исследования, статистически обработал фактический материал, проанализировал полученные результаты, сделал выводы, дал практические рекомендации.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе одна из них в ведущем периодическом издании из перечня ВАК Минобрнауки России.

Объём и структура работы. Диссертация изложена на 241 странице, состоит из введения, шести разделов, выводов, практических' рекомендаций, списка использованных источников в количестве 270, включая 25 иностранных, содержит 40 таблиц и 61 рисунок.

1 Обзор литературы

В разделе представлен анализ литературных источников, посвященных использованию гематологических показателей рыб для оценки условий их выращивания и обитания. Рассмотрено влияние абиотических и антропогенных факторов среды на гематологические показатели рыб. Приведены способы повышения резистентности рыб в аквакультуре. На основании литературных данных описаны видовые, возрастные, се-

зонные и половые особенности гематологических показателей осетровых, окуневых и сиговых рыб.

2 Материал и методика

Объектами исследований в 2008-2011 гг. явились стерлядь (Acipenser ruthenus Linnaeus, 1758), окунь (Perca fluviatilis Linnaeus, 1758) и сиг (Coregonus lavaretus Linnaeus, 1758).

Оценка физиологического состояния и условий выращивания стерляди разн< возраста в УЗВ проводилась в 2009-2010 гг. на базе рыбоводного цеха ООО «КМП i ва», расположенного в г. Светлом Калининградской области. К началу исследовав (февраль 2009 г.) выращиваемая на предприятии стерлядь младшего возраста (6acci ны УЗВ-2) достигла возраста 10 месяцев, а старшего (бассейны УЗВ-1) - 20 месяцев, конце исследований (ноябрь 2010 г.) их возраст составил соответственно 30 и 40 ме цев. Плотность посадки младшей и старшей возрастных групп стерляди в период : следований была близка и составляла соответственно 33 и 31 кг/м3. В период вырав вания стерляди определяли температуру и гидрохимические показатели. Кормили рь гранулированными кормами датской фирмы «Aller aqua» два раза в светлое время ток. С 06.07.2009 г. вся исследуемая стерлядь ежедневно вместе с кормом получ; пробиотический препарат «Субтилис» в дозе 0,5 мл/кг корма. В период выращива! проводили контрольные взвешивания и измерения рыб. На основании полученн данных рассчитывали показатели темпа роста. Кровь у стерляди брали прижизненно гемального канала хвостового стебля.

Сбор материала для определения гематологических показателей окуня и сига Виштынецкого озера проводили в 2008-200Э гг. в мае, августе и декабре в полевых ловиях. Рыбу ловили сетями в 11, 38, 51, 55 и 81 квадратах (рисунок 1). Обработку ] териала осуществляли по стандартной методике: определяли массу, длину, возраст пол исследуемых рыб.

По общепринятым методикам определяли: концентрацию гемоглобина (НЬ эритроцитов (Эр), лейкоцитов (JI), общего белка в сыворотке крови (ОБС), содерж; ние гемоглобина в одном эритроците (СГЭ), цветной показатель (ЦП), скорость оо дания эритроцитов (СОЭ), коллоидную устойчивость сывороточных белков (КСБ лейкоцитарную формулу, индексы сдвига лейкоцитов (ИСЛ) и нейтрофилов (ИСН патологические изменения эритроцитов. Идентификацию форменных элементов крови проводили по классификации Т.Н. Ивановой [1983]. Цитометрические пар; метры эритроцитов измеряли автоматически с помощью системы анализа изображ ний «Видео-Тест-Морфо». Статистическую обработку полученных результатов bi

подняли по общепринятыми методикам [Аксютина, 1968; Плохинский, 1970]. Для подтверждения достоверности различий использовали критерий Стьюдента. Для установления связей между показателями проводили корреляционный анализ. Общий объем собранного материала представлен в таблице 1.

Таблица 1 - Общий объем исследованного материала

Вид рыб Количество исследованных рыб Количество исследованных параметров

Материал по определению уровня и динамики гематологических показателей стерляди разного возраста и оценке условий её выращивания в ООО «КМП Аква» г. Светлый Калининградской области

Младшая возрастная группа стерляди (10 - 30 месяцев) 110 2970

Старшая возрастная группа стерляди (20 - 40 месяцев) 110 2970

Материал по определению гематологического статуса рыб и оценке экологического состояния озера Виштынецкого

Окунь 190 4750

Сиг 115 2875

Всего 525 13565

3 Термические и гидрохимические условия выращивания стерляди в ООО «КМП Аква» В период выращивания стерляди разного возраста определяли температуру воды и основные гидрохимические параметры.

В результате гидрохимических исследований было установлено, что поступающая и циркулирующая вода в УЗВ-1 и УЗВ-2 соответствует нормам для установок с замкнутым водоснабжением, а незначительные отклонения от нормы не оказывают существенного влияния на объекты выращивания.

В некоторых контрольных точках видно снижение концентрации растворенного в воде кислорода до минимально допустимых концентраций, что связано с повышением температуры воды и накоплением большого количества биогенных веществ (рисунки 2, 3).

I 30

§20 <3

о.

а 10

12

/ V5 ч 1

ч

1

_

С\ С> С"\ ©ч С\

г-1 о] г-] о) гч с*; с») г) сч гч г-)

т-н ГО

О) Г1 Г-1 СЧ С1 П С-1 С1 ГЧ СЧ <4

СЧ СЧ со «п

Г]

СП 1Л

■ УЗВ-2

нижний оптимум

-УЗВ-1

■ верхний оптимум

Рисунок 2 - Среднесуточные колебания температуры воды в бассейнах УЗВ

; г1 г-1 г-1 г-1 г-1 о1 с-1 г-1 г-1 г-1

----УЗВ-2

-УЗВ-1

-— минимальная допустимая концгк

Рисунок 3 - Среднесуточные показате концентрации кислорода в бассейнах УЗВ

Диапазон значений основных параметров водной среды бассейнов обеих УЗВ сравнении с технологической нормой [Милыптейн, 1972; Пономарев, Иванов, 200< представлен в таблице 2.

Таблица 2 - Гидрохимические показатели в бассейнах УЗВ

Показатель Технологическая норма [по Мильштейну, 1972; Пономареву и Иванову, 2009] УЗВ-1 УЗВ-2

Водородный показатель (рШ 6,0 - 8,0 6,0 - 7,0 6,0-7,0

Азот аммонийный, мг/л Не более 0,5 - 1,0 0,01 -1,18 0,08-1,00

Аммиак, мг/л До 0,1 0,0001 - 0,0080 0,0001-0,006

Азот нитритный, мг/л До 0,1 0,01 - 0,19 0,02-0,18

Азот нитратный, мг/л До 1,0 0,4-1,30 0,18-1,06

Железо (общее), мг/л До 1 0,05-0,90 0,05-0,60

Хлориды, мг/л До 10 0,01 - 8,00 0,05-6,00

Сульфаты, мг/л До 10 0,10-12,00 0,05-20,00

В результате исследований установлено, что температурные и гидрохимические условия в УЗВ были благоприятными для выращивания стерляди разных возрастных групп. Значения температуры и гидрохимических показателей, а также их динамика в бассейнах УЗВ-1 и УЗВ-2 были сходными, что позволило нам сравнивать между собой рыб, содержащихся в разных установках.

4 Рыбоводно-биологическая характеристика стерляди разного возраста (Аирешег

пиЬепиэ, 1758) при выращивании в установке замкнутого водоснабжения

4.1 Рыбоводно-биологическая характеристика стерляди разного возраста при выращивании в УЗВ

К началу исследований (февраль 2009 г.) индивидуальная средняя масса стерляди старшей возрастной группы из бассейнов УЗВ-1 в возрасте 20 месяцев составляла 668,0 г, а младшей возрастной группы из бассейнов УЗВ-2 в возрасте 10 месяцев -162,0 г. К июлю 2009 г. индивидуальная средняя масса стерляди старшей возрастной группы, достигшей возраста 24 мес., увеличилась до 852,0 г., а младшей возрастной группы, достигшей возраста 14 мес. - до 240,8 г.

В период выращивания стерляди с февраля по июль 2009 г. менялись среднесуточная скорость роста и относительный среднесуточный прирост. Увеличение массы тела старшей возрастной группы стерляди наблюдалось при среднесуточной скорости роста и относительном среднесуточном приросте, равных 0,269 и 0,268%, в младшей возрастной группе при - 0,420 и 0,416%, соответственно. На показатели роста выращиваемой стерляди в период исследований влиял гидрохимический режим. Некоторое их снижение в обеих возрастных группах стерляди в период с апреля по июль 2009 г. отмечалось в период снижения концентрации кислорода в воде и повышения концентрации нитритов (рисунок 4). Схожую динамику роста стерляди в УЗВ при снижении концентрации кислорода и повышении нитритов наблюдали и другие авторы [Матишев, 2006; Коваленко, 2007].

Е5

старшая возрастная группа

□ ОСП, % 3 ССР, %

^ШЭ Км

♦ концентрация кислорода, мг/л

—концентрация нитритов, мг/л

Рисунок 4 - Динамика роста стерляди двух возрастных групп

Выживаемость особей старшей возрастной группы стерляди за период с февраля по июль 2009 г. составила 98,4%, а младшей возрастной группы - 98,9%.

4.2 Сравнительная характеристика рыбоводно-биологических показателей стерляди разного возраста без применения и с применением пробиотика «Субтилис» при выращивании в УЗВ

В период исследований с 23.05. по 05.07.2009 г. обе возрастные группы стерляди потребляли корма без дополнительных препаратов и добавок. С 06.07. по 18.08.2009 г. в корма исследуемой стерляди стали добавлять пробиотический препарат «Субтилис». Гидрохимические показатели в эти периоды в УЗВ-1 и УЗВ-2 представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Гидрохимические показатели в бассейна?; УЗВ-1 и УЗВ-2

Показатель УЗВ-1 УЗВ-2

23.05.-05.07. 06.07.-18.08. 23.05.-05.07 06.07.-18.08

Водородный показатель (рН) 7,0 7,0 7,0 7,0

Азот аммонийный, мг/л 0,55 0,57 0,60 0,63

Аммиак, мг/л 0,001 0,001 0,025 0,020

Азот нитритный, мг/л 0,06 0,11 0,07 0,08

Азот нитратный, мг/л 0,83 0,87 0,84 0,93

Железо, мг/л 0,05 0,05 0,05 0,05

Хлориды, мг/л 1,0 2,0 1,0 3,5

Сульфаты, мг/л 0,3 0,3 0,3 0,3

Наиболее интенсивный рост за время выращивания с 23.05 по 18.08.2009 г. отмечен, в период с 06.07 по 18.08.2009 г., когда в корм добавляли пробиотик «Субтилис» (рисунок 5), что согласуется с данными, полученными акад. Г.Г. Матишевым с соавторами [2006] при исследовании эффективности введения пробиотика «Субтилис» в продукционные корма молоди стерляди массой 19,0 - 68,0 г. У стерляди, потреблявшей корм с пробиотическим препаратом, при 100% выживаемости наблюдалось увеличение массы тела в 1,6 раза. В период наших исследований наблюдалась аналогичная динамика роста у стерляди младшей возрастной группы массой от 190,0 - 241,0 г и у старшей возрастной группы массой 830,0 - 852,5 г. В период потребления корма с пробиотическим препаратом «Субтилис» среднесуточная скорость роста стерляди младшей возрастной группы увеличилась в 2 раза, а старшей - в 4 раза. Таким образом, показатели роста стерляди обеих возрастных групп в период исследований с мая по август 2009 г. свидетельствуют о том, что пробиотический препарат

«Субтилис» стимулирует рост рыб и способствует массонакоплению при двукратном введении препарата в сутки в дозе 0,5 мл/кг корма [Сементина, Серпунин, 2010].

1.4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 О

-*-' —t— л. II, 1,11,1,11

жЩ Ml

-рГПЩ-

старг без пробиотика пая возрастная г с пробиотиком >yima млад! без пробиотика пая возрастная г с пробиотиком руппа

25 20 15 10 5 0

3 ОСП, % ШШ1 Км

ССР, % '

■температура воды, °С —концентрация кислорода, мг/л

Рисунок 5 - Показатели роста стерляди обеих возрастных групп в периоды без применения и с применением пробиотика «Субтилис»

В период исследования с августа 2009 г. по ноябрь 2010 г. стерляди разного возраста постоянно давали корм вместе с пробиотиком. Масса стерляди старшей возрастной группы увеличилась с 852,0 г до 1737,8 г, а стерляди младшей возрастной группы - с 240,8 г до 1316,0 г. Максимальное увеличение показателей роста стерляди обеих возрастных групп наблюдалось в летний период, что было связано с более высокой температурой воды в бассейнах УЗВ. Высокие показатели роста стерляди с октября 2009 г. по февраль 2010 г. были обусловлены периодическими повышениями температуры воды на фоне общего её снижения, которые быстро активизировали обменные процессы в организме рыб благодаря пролонгированному действию пробиотического препарата «Субтилис».

5 Гематологическая характеристика стерляди разного возраста (Acipenser ruthenus Linnaeus, 1758) при выращивании в установке замкнутого водоснабжения и оценка условий выращивания

5.1 Гематологическая характеристика стерляди разного возраста и оценка условий выращивания в УЗВ

В феврале концентрация эритроцитов у стерляди старшей возрастной группы составляла 0,87±0,07, а младшей - 0,96±0,14 Т • л"1, что согласуется с данными Т.В. Васильевой [2010], выявленными для годовиков и двухгодовиков стерляди, выращи-ваваемой в УЗВ. При этом концентрация гемоглобина находилась на уровне 49,99±2,08 г-л'1 - у старшей возрастной группы стерляди и 45,13±2,54 г-л"1 - у младшей, что характерно для рыб, выращиваемых в индустриальных условиях. К июлю концентрация эритроцитов увеличилась относительно февральских значений в обеих возрастных группах почти в 2 раза, что повлекло за собой увеличение концентрации

гемоглобина. Эти изменения были связаны с возрастом и массой рыб, так как в процессе онтогенеза концентрация гемоглобина в русле крови меняется - с возрастом идет её нарастание [Иванова, 1983; Житенева, Рудницкая, Калюжная, 1997], а также с усилением эритропоэтической активности, которая наблюдается у рыб в весенне-летний период [Житенева, Рудницкая, Калюжная, 1997]. Это прослеживалось и в период наших исследований, даже, несмотря на то, что стерлядь выращивалась при постоянной температуре воды без какой-либо ее сезонной динамики.

Значения концентрации эритроцитов в периферической крови обеих возрастных групп стерляди соответствовали возрастной динамике изменений показателей у этого вида осетровых рыб, что указывало на хорошее физиологическое состояние объектов выращивания [Сементина, Серпунин, 2009а]. Скорость оседания эритроцитов в крови исследованных рыб обеих возрастных групп в период с февраля по июль 2009 г. находилась в норме, которая для осетровых, в том числе и стерляди, колеблется в пределах 1 - 6 мм/ч [Валова, Хованский, 2009; Васильева, 2010]. Концентрация белка в сыворотке крови была высокой и колебалась в пределах 37,13 - 53,08 г-л"1 у старшей возрастной группы, и 27,86 - 37,50 г-л"1 у младшей. Уровень КСБ в обеих возрастных группах стерляди соответствовал 0,05% СаС12, что свидетельствует о преобладании альбумина и у-глобулинов в сыворотке крови исследованных рыб над а- и Р-глобулинами.

По данным Л.Д. Житеневой с соавторами [1997], площадь поверхности эритроцита стерляди из естественных водоёмов в норме составляет 73,14 мкм2' В период наших исследований с февраля по июль 2009 г. площадь поверхности эритроцита разновозрастной стерляди была выше, чем у стерляди из естественных водоемов и колебалась в пределах 81,86 - 100,04 мкм2 у 20 - 24-х месячных рыб; 75,03 - 121,78 мкм2 у 10 - 12-ти месячных рыб, что было связано с более активным ростом стерляди, выращиваемой в УЗВ, при контролируемых температурных условиях, так как изменение площади поверхности эритроцитов отражает уровень обменных процессов и функциональное состояние организма в определённый период жизни рыб [Житенева, Рудницкая, Калюжная, 1997].

В периферической крови стерляди разного возраста в период исследования с февраля по июль 2009 г., были обнаружены 8 форм лейкоцитов: из гранулоцитов -миелоциты нейтрофильные, метамиелоциты нейтрофильные, палочкоядерные и сег-ментоядерные нейтрофилы, эозинофилы; из агранулоцитов - моноциты, лимфоциты. Абсолютное большинство в лейкоцитарной формуле исследуемых рыб составляли лимфоциты, что свидетельствует о высокой ступени развития клеточного иммунитет [Житенева, Макаров, Рудницкая, 2001]. В лейкоцитарной формуле обеих возрастных групп исследованной стерляди второе место по численности занимали нейтрофилы, количество которых находилось в пределах значений, полученных для осетровых рыб

12

Л.В. Баденко [1966] (3-15%) и составляло 10,2% в крови старшей возрастной группы, и 11,5% - в младшей группе. В феврале и июле 2009 г. отмечался нейтрофильный сдвиг влево за счет повышения в большом количестве числа незрелых гранулоцитов (метамиелоцитов и миелоцитов), что свидетельствовало о значительном увеличении активности нейтрофилопоэза в эти месяцы. Увеличение процента эозинофилов в периферическом русле исследованной стерляди младшей возрастной группы в феврале 2009 г., по-видимому, являлось аллергической реакцией на кратковременное увеличение концентрации нитратного азота в бассейнах УЗВ-2.

Нами были выявлены достоверно сильные связи показателей крови стерляди обеих возрастных групп с факторами среды с февраля по июль 2009 г. (таблицы 4, 5).

Таким образом, из изученных факторов среды наибольшее влияние на показатели крови стерляди обеих возрастных групп оказывали температура воды, концентрация кислорода и рН.

Установленные нами изменения и уровень показателей крови свидетельствует об успешной адаптации стерляди разного возраста к условиям в УЗВ и позволяют утверждать, что исследованная стерлядь обеих возрастных групп находилась в хорошем физиологическом состоянии, свидетельствующем о благоприятных условиях выращивания в УЗВ ООО «КМП Аква».

5.2 Гематологическая характеристика стерляди разного возраста без применения и с применением пробиотика «Субтилис» и оценка условий выращивания в УЗВ

Исследования показателей крови в периоды, когда стерлядь получала корм без пробиотического препарата (май-июль 2009 г.) и с его введением в корм (июль-август 2009 г.) показали, что в период, когда в корм добавляли пробиотик «Субтилис», концентрация эритроцитов и общего белка в сыворотке крови старшей возрастной группы стерляди были ниже (соответственно при р < 0,05 и р < 0,001), чем в период, когда в корм не добавляли данный пробиотический препарат [Сементина, Серпунин, 2010]. Снижение концентрации общего белка в сыворотке крови (р < 0,05) наблюдалось и у младшей возрастной группы рыб, что было связано с увеличением показателей роста выращиваемых рыб.

Кроме зрелых форм эритроцитов в периферической крови исследованных групп стерляди в период потребления пробиотика «Субтилис» отмечали и юные формы эритроцитов - полихроматофильные и оксифильные нормобласты, что было связано с активацией эритропоэза в этот период при активизации обменных процессов в организме исследованных рыб. В крови стерляди старшей возрастной группы их доля составляла 0,08%, а в младшей - 0,12%. Анализ цитометрических параметров эритроцитов обеих возрастных групп стерляди в период потребления ими пробиотика «Субти-

Таблица 4 - Корреляционная связь показателей крови младшей возрастной группы стерляди с температурой и гидрохимическими параметрами при выращивании в УЗВ (г) ;

Показатели Т, °С 02, мг/л рн МН4+, мг/л ИОз, мг/л 804\ мг/л СГ, мг/л

НЬ, Т-л1 0,84+0,05 - 0,84+0,05 0,84+0,05 0,84±0,05 - 0,84±0,05 0,84±0,05

Л, Г-л1 - 0,78±0,07 0,76±0,08 0,81±0,06 0,73+0,09

СОЭ, мм/ч 0,77+0,07 - 0,79±0,07 - 0,72±0,09 0,66±0,10 - 0,66+0,10 - 0,45±0,15

КСБ, % - 0,83±0,06 0,83+0,06 0,81+0,06 - 0,57+0,12 0,57+0,12 0,60±0,12

Б, мкм"1 - 0,77+0,07 0,81±0,06 0,70±0,09 - 0,47±0,14 - 0,76+0,08 0,76±0,08

Р, мкм - 0,78+0,07 0,81+0,06 0,72±0,09 - 0,44+0,15 - 0,74+0,08 0,74+0,08 0,40±0,15

А, мкм - 0,79+0,07 0,81±0,06 0,74±0,08 - 0,70+0,09 0,70+0,09 0,46±0,15

В, мкм - 0,78±0,07 0,82±0,06 0,70±0,09 - 0,51+0,14 - 0,79+0,07 0,79±0,07

Примечание, г = 0,40-0,60 - корреляция слабая; г = 0,60-0,70 - корреляция средняя; г = 0,70-1,00 - корреляция сильная.

Таблица 5 - Корреляционная связь показателей крови старшей возрастной группы стерляди с температурой и гидрохимическими параметрами при выращивании в УЗВ (г)

Показатели Т, °С 02, мг/л рН Ш4+, мг/л Ы02, мг/л N03, мг/л 804", мг/л СГ, мг/л

ОБС, г-л"1 0,70±0,09 - 0,66±0,10 - 0,74±0,08 - 0,74±0,08

Эр, Г-л1 0,68±0,10 - 0,73±0,08 - 0,57±0,12 0,66+0,10 0,86+0,05 - 0,86±0,05

НЬ, Т-л1 0,85±0,05 - 0,85±0,05 0,85±0,05 0,85+0,05 - 0,85±0,05 0,85±0,05

Сн 0,84+0,05 0,61+0,11 - 0,61±0,11 0,62+0,11

Э 0,53+0,13 - 0,59±0,12 - 0,42+0,15 0,67±0,10 0,45±0,15 0,79+0,07 - 0,79±0,07

Млф - 0,58+0,12 0,64±0,11 0,47±0,14 - 0,66±0,10 - 0,44+0,15 - 0,81+0,06 0,81±0,06

8, мкм 0,79+0,07 0,75±0,08 0,84±0,05 0,84+0,05

Р, мкм - 0,82±0,06 0,79±0,07 0,85+0,05 0,79+0,07

Рк - 0,45±0,15 0,69±0,10 0,73+0,09 - 0,73±0,09

Ро 0,89±0,04 - 0,90±0,04 - 0,87±0,04 0,62+0,11 - 0,62+0,11 - 0,64±0,11

А, мкм - 0,92±0,03 0,89±0,04 0,95±0,02 - 0,42±0,15 0,42±0,15 0,85±0,05

А/В - 0,88±0,04 0,88+0,04 0,85±0,05 - 0,61±0,11 0,61±0,11 0,63+0,11

Примечание. То же, что к таблице 4.

лис» показал достоверное увеличение таких показателей как: площадь, периметр, большая ось эритроцита и отношение большой оси к малой (таблица 6).

Таблица 6 - Цитометрические параметры эритроцитов стерляди разного возраста

Параметры УЗВ-2 УЗВ-1

01.07.2009 14 мес. 18.08.2009 16 мес. 01.07.2009 24 мес. 18.08.2009 26 мес.

Площадь, мкм2 75,03+0,49 79,2б±0,25 81,8б±0,74 92,5110,34^

Периметр, мкм 32,02±0,07 З'г 33,45+0,05 ^ 33,38+0,19 35,88±0,07

Большая ось 11,48±0,03 12,ЗОЮ,03 11,78+0,06 3'2 13,08+0,06

Большая ось/ малая ось 1,38+0,01 3'2 1,50±0,01 2,2 1,33±0,001 3,5 1,4б±0,012'2

^3 - различия между группами достоверны соответственно при р < 0,05; 0,01; 0,001; ~ ^ - различия между рыбами разных возрастов внутри группы достоверны соответственно при р < 0,05; 0,01; 0,001.

Эти данные еще раз подтверждают связь формы и размеров клеток красной крови с уровнем обмена веществ в организме рыбы.

В периферической крови стерляди всех возрастов в июле и августе 2009 г. были обнаружены восемь форм лейкоцитов. В августе 2009 г. достоверно больше, чем в июле 2009 г. у младшей возрастной группы был процент метамиелоцитов нейтро-фильных (р < 0,01), палочкоядерных (р < 0,001) и сегментоядерных нейтрофилов (р < 0,05) и общего числа нейтрофилов (р < 0,001), а у старшей только процент метамиелоцитов нейтрофильных (р < 0,05) и общего числа нейтрофилов (р < 0,05). Активизация нейтрофилопоэза повлекла за собой снижение в августе 2009 г. процента малых лимфоцитов и как следствие - общего числа лимфоцитов. Присутствие в корме рыб в августе 2009 г. пробиотика привело к увеличению активности нейтрофилопоэза, что указывает на повышение скорости обменных процессов. При длительном действии пробиотика «Субтилис» (1,5 года) наблюдается адаптация организма стерляди разного возраста к данному препарату и стабилизация гематологических параметров у верхней границы значений характерных для осетровых видов рыб.

Отсутствие с июля 2009 г. по ноябрь 2010 г. (в период кормления рыбы кормом с добавлением пробиотического препарата «Субтшшс») сильных корреляционных связей гематологических показателей стерляди разных возрастных групп с гидрохимическими характеристиками и единичное обнаружение средних по силе связей (таблицы 7, 8), подтверждает положительное влияние препарата «Субтилис» на организм исследуемой стерляди обеих возрастных групп и свидетельствует о стабилизации гематологических параметров и улучшении физиологического состояния стерляди.

В ходе исследований выяснилось, что физиологическое состояние стерляди раз-

Таблица 7 - Корреляционная связь показателей крови младшей возрастной группы стерляди с температурой и гидрохимическими параметрами при добавлении в корм пробиотического препарата «Субтилис» (г)

Показатели Т, °С 02, мг/л рн Ы03, мг/л Бе (общее), мг/л 80,Г, мг/л СГ, мг/л

НЬ, Т-л"1 0,44+0,15

Л, Г-л"1 0,44±0,15

КСБ, % СаС1г 0,47+0,14 - 0,40+0,15 0,47±0Д4

Б, мкм2 0,40+0,15

А, мкм 0,42+0,15

В, мкм 0,41±0Д5 - 0,44±0,15

Примечание, г = 0,40-0,60 - корреляция слабая; г = 0,60-0,70 - корреляция средняя; г = 0,70-1,00 - корреляция сильная.

Таблица 8 - Корреляционная связь показателей крови старшей возрастной группы стерляди с температурой и гидрохимическими параметрами при добавлении в корм пробиотического препарата «Субтилис» (г)

Показатели Т,°С Ог, мг/л N03, мг/л Ре (общее), мг/л 804", мг/л С1", мг/л

ОБС, г-л"1 0,41+0,15

НЬ, Т-л"1 - 0,46+0,14 0,53+0,15

Млф 0,45±0,15

Б, мкм2 - 0,61±0,12 0,46±0,14 - 0,50+0,14

Р, мкм 0,58±0,12 0,49±0Д4 - 0,50±0Д4

Рк 0,41±0Д5 0,41±0Д5

А, мкм - 0,64+0,11 - 0,46±0Д4

А/В

Примечание. То же, что к таблице 7.

ного возраста и условия её выращивания в УЗВ на кормах с пробиотиком «Субтилис» были хорошими, так как значения гематологических показателей обеих возрастных групп стерляди находились на уровне характерном для осетровых видов рыб, выращиваемых в индустриальных условиях.

6 Гематологические показатели окуня (Perca fluviatilis Linnaeus, 1758) и сига (Coregonus lavaretus Linnaeus, 1758) и оценка экологического состояния озера Виштынецкого

6.1 Гематологические показатели окуня и экологическое состояние озера Виштынецкого

Весенний период. Гематологические исследования, проведенные в мае 2008 и 2009 гг. в квадратах 38, 11 и 55 показали, что морфологические характеристики эритроцитов у всех исследованных рыб не имели отклонений от нормы. Весной 2008 и 2009 гг. у исследованных окуней разного возраста наблюдалась невысокая концентрация гемоглобина в крови (42,06 - 56,32 г-л"1), находящаяся в зависимости от возраста, массы рыб и места исследования в озере Виштынецком. По мнению Л.Д. Житеневой с соавторами [1997], потребность в гемоглобине у окуня, как и у ската, повышается только при быстрых бросках. Исследования JI.B. Савиной [2004] окуня Куршского залива показало, что при неудовлетворительном физиологическом состоянии, вызванном антропогенным загрязнением, концентрация гемоглобина в крови этого вида рыб снижается в весенний период до 40 г-л"1, что ниже значений полученных нами. Вместе с тем, в крови исследованных нами окуней разного возраста установлена большая концентрация эритроцитов 0,93-2,02 Т-л"1, которая в крови окуней из 38-го квадрата озера Виштынецкого была значительно выше (1,90 Т-л"1), чем у окуней исследованных JI.B. Савиной [2004] в Куршском заливе (1,55 Т-л"1) при сходной массе тела (104 и 116 г, соответственно): Наличие резервного количества эритроцитов в крови окуней вероятно связано с его хищным образом жизни и является тем необходимым условием, которое обеспечивает возможность высвобождения требуемой организму энергии для осуществления быстрых бросков.

Концентрация белка в сыворотке крови исследованных окуней в весенний период 2008 и 2009 гг. была высокой (23,72 - 51,86 г-л"1) и варьировала в зависимости от массы, что говорит об активном питании рыб в преднерестовый период и о хорошей их обеспеченности пищей в данных условиях обитания, а также позволяет прогнозировать благоприятный исход нереста и лучшую жизнеспособность будущего потомства. Концентрация лейкоцитов в крови окуня также колебалась в зависимости от возраста, массы и района обитания в озере Виштынецком и находилась в пределах 96,75 -165,50 Г-л"1. При этом у окуня из озера Виштынецкого массой 109 г концентрация лей-

коцитов была достоверно выше (р < 0,01), чем у окуня такой же массы из Куршского залива (рисунок 7а).

200 150 100 50 0

Куршский залив

114 |.. X. .1

-

1111

Я!!

озеро Вшггынецкое

6,0 5,0 4,0 £ 3,0 2,0 1.0 0,0

1,4

иг

4,8

2,5

Куршский озеро

залив Вишгынецкое

ЕЗ Мн □ Ммн

Рисунок 7 - Достоверные различия концентрации лейкоцитов и процента юных нейтрофилов в крови окуней Куршского залива [Савина, 2004] и озера Виштынецкого

Лейкоцитарная формула крови окуней, исследованных в весенние периоды 2008 и 2009 гг., выловленных в 38-м, 11-ми 55-м квадратах, была представлена лимфоцитами (большими и малыми), нейтрофильными миелоцитами и метамиелоцитами, па-лочко- и сегментоядерными нейтрофилами, моноцитами и псевдоэозинофилами. Среди лимфоцитов преобладали малые лимфоциты, что говорит о хорошем физиологическом состоянии исследованных окуней, так как, по мнению Т.И. Моисеенко [1997], у здоровых рыб лимфоциты представлены в основном зрелыми формами, а молодые и созревающие клетки встречаются единично. Среди нейтрофилов у исследованных окуней разного возраста, обитающих в Виштынецком озере, преобладали юные формы - нейтрофильные миелоцигы и метамиелоциты, процент которых был достоверно выше, чем у окуня из Куршского залива (рисунок 76).

Из цитометрических параметров эритроцитов окуня из озера Виштынецкого массой 109 г площадь и периметр были достоверно выше (р < 0,01), чем у окуня такой же массы из Вислинского залива, где рыбы, как и в Куршском заливе подвержены антропогенному прессу. Это свидетельствует о том, что у окуней озера Виштынецкого в преднерестовый период идут более интенсивные процессы кроветворения, чем у окуней из Вислинского залива, так как в их крови циркулирует большее количество более молодых эритроцитов.

Летний период. Исследования, проведенные летом, тоже не выявили каких-либо отклонений от нормы в морфологических характеристиках эритроцитов окуня. Морфологическая картина крови окуня в летний период выглядела следующим образом (таблица 9).

У исследованных окуней, по мере роста их в естественных условиях от мая к августу, отмечалось увеличение концентрации эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, общего числа нейтрофилов и лейкоцитов.

Таблица 9 - Гематологические показатели окуня озера Виштынецкого в летний период 2008 г.

Показатели Квадрат 81

четыр ёхгодовики пятигодовики

М±ш М±т

Концентрация эритроцитов, Т-л"1 1,93±0,17 1,70±0,08

Концентрация гемоглобина, г-л"1 50,90±3,10 48,26±2,09

Содержание гемоглобина в эритроците, пг 27,90±2,78 29,16+2,19

Цветной показатель 0,84±0,08 0,87±0,07

Общий белок в сыворотке крови, г-л"1 39,03+1,62 38,52+1,39

Концентрация лейкоцитов, Г-л"1 141,50+13,58 2 204,00+10,832

Отношение эритроцитов к лейкоцитам 16,39±4,11 8,60±0,73

Лейкоцитарная формула. %:

миелоциты нейтрофильные 6,30+0.892 - 3,60±0,26

метамиелоциты нейтрофильные 6,00+1,03 4,10+0,43

палочкоядерные нейтрофилы 1,55+0,33 1,40±0,17

сегментоядерные нейтрофилы 0,80+0,09 0,80±0,09

общее число нейтрофилов 14,65+1,422 9,95±0,702

псевдоэозинофилы 1,95+0,33 2 0,70+0,122

моноциты 1,05+0,31 1,00±0,16

большие лимфоциты 9,35±0,80 11,30±0,68

малые лимфоциты 73,00+0,853 77,10±0,503

общее число лимфоцитов 82,35+1,432 88,40+0,65 2

Индекс сдвига нейтрофилов 19,65+3,25 12,55±1,701

Индекс сдвига лейкоцитов 0,20+0,022 0,12+0,012

Масса, г 299,6012,83' 317,90+5,79 1

Промысловая длина, см 20,65±0,163 24,83±0,113

п 20 20

112'3 - различия между рыбами разных возрастов в одном квадрате достоверны соответственно при р < 0,05; 0,01; 0,001.

Зимний период. В период зимнего исследования 2009 г. нами была зафиксирована в крови окуня разного возраста высокая концентрация эритроцитов (1,08 - 1,21 Т-л"1), гемоглобина (69,89 - 105,01 г-л'1), общего белка в сыворотке крови (39,72 -57,01 г-л"1), лейкоцитов (232,75 - 248,50 Г-л"1) и СГЭ (66,40 - 88,31 пг), ЦП (1,99 -2,65), что было связано с адаптацией организма окуня к зимнему периоду. Известно, что к зиме данные показатели крови увеличиваются по мере роста рыб и подготовки их к зимовке [Серпунин, 1983, 2002]. Окуни обитающие в западном районе озера Виштынецкого были достаточно хорошо подготовлены к зимнему периоду. Из чего можно сделать вывод о благоприятном исходе зимовки, благодаря нахождению их в хорошем физиологическом состоянии, о чем свидетельствует высокая концентрация в крови белка и лейкоцитов.

Среди окуней в период исследований не обнаружено особей с гематологическими параметрами характерными для окуней, подверженных антропогенному прессу. Это свидетельствует о том, что у окуней из озера Виштынецкого не было необходимости в активации защитных функций организма, проявляющихся в картине крови. Судя по установленным нами в различные сезоны года гематологическим показателям окуня его физиологическое состояние было благополучным, что указывает на благоприятные экологические условия в западном, северном, южном и центральном районах озера.

6.2 Гематологические показатели сига и оценка экологического состояния озера Виштынецкого

Весенний период. Исследования крови сига, проведенные весной 2008 и 2009 гг., не выявили каких-либо отклонений от нормы в морфологических характеристиках эритроцитов. Концентрация гемоглобина у сигов, в зависимости от возраста, массы и района исследования, колебалась в пределах 44,05 -77,84 г-л"1. При этом концентрация эритроцитов находилась в переделах 0,94 - 1,18 Т-л"1 и была близка к норме для сига озера Имандра (0,98 - 1,10 Т-л'1) [Моисеенко, 1997]. Также нами были отмечены большие концентрации гемоглобина и эритроцитов в крови самцов по сравнению с самками. Оснащенность организма сига общим сывороточным белком в этот период была высокой (40,30 - 62,53 г-л"1), что связано с накоплением белка в крови в период повышения температуры воды, стимулирующей активизацию питания рыб. Концентрация белка в сыворотке крови самцов была достоверно выше, чем у самок (р < 0,001), что отражает половые различия данного показателя.

В периферической крови семи- и восьмигодовалых сигов в весенний период 2008 и 2009 гг. нами были обнаружены восемь форм лейкоцитов: миелоциты и метамиело-циты нейтрофильные, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, псевдоэози-нофилы - из гранулоцитов, а также моноциты, большие и малые лимфоциты - из агра-нулоцитов.

Летний период. У исследованных сигов в летний период 2008 г. тоже не было выявлено каких-либо отклонений от нормы в морфологических характеристиках эритроцитов. Некоторые морфологические характеристики крови семи- и восьмигодовалых сигов представлены в таблице 10.

Зимний период. В период наших исследований зимой 2009 г. у сигов в зависимости от возраста, массы и пола наблюдалась высокая обеспеченность организма гемоглобином (88,0 - 121,0 г-л"1), что согласуется с данными, полученными Т.И. Моисеенко [1997] для сига из олиготрофных озер в условиях экологического оптимума (80,0 -130,0 г-л"1). При этом концентрация эритроцитов у исследованного нами сига составляла в среднем 1,03 Т-л"1. По мнению Т.И. Моисеенко [1997], концентрация эритроцитов в

крови здоровых рыб в среднем составляет 1,04 Т-л"1, что позволяет нам говорить о хорошем физиологическом состоянии сигов, обитающих в западном районе озера Виш-тынецкого. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) у сиговых рыб, по данным Т.И. Моисеенко [1997], находится в пределах 1-3 мм/ч, что согласуется с нашими данными, полученными в зимний период. Увеличение СОЭ в нашем случае до 3,50 мм/ч было связано с нахождением организма рыб в состоянии готовности к нересту, что подтверждалось и текучестью половых продуктов у исследованных самок. При этом отмечалась высокая концентрация белка в сыворотке крови сигов (61,46 - 82,45 г-л"1). Концентрация лейкоцитов колебалась в пределах 3,0 - 11,0 Г • л"1.

Таблица 10 - Гематологические показатели сига в летний период 2008 г.

Показатели Квадрат 81

семигодовики восьмигодовики

самки самцы самки самцы

Эр, Т-л"1 1,00±0,013 1ДЗ+0.023 1,08±0,01 1,12+0,021

НЬ, гл"1 48,46±1,182 55,46+1,52" 51,36+0,593 58,14+1,063

СГЭ.пг 48,28±1,28 49,27+1,391 47,68+0,40' 51,96+1,262

ЦП 1,34±0,05 1,31+0,05 1,33+0,02 1,40±0,05

ОБС, г-л"1 56,07+0,641 58,40+0,731 60,07±1,10 60,08±1,45

Л, Г-л"1 148,42+9,481 Ш/^МЛЗ1 118,57+8,551 125.99i4.321

Э/Л 8,74±0,65 7,24+0,44 7,40±0,361 8,98+0,34 2

Масса, г 536,07±13,153 736,23+28,603 540,28±11,033 823,33±14,613

Промысловая длина, см З7,70±0,163 40,40+0,253' 41,58±0,20 41,10+0,24

п 7 8 6 9

1,2,3- различия по полу между рыбами разных возрастов в одном квадрате достоверны соответственно при р < 0,05; 0,01; 0,001.

В период исследований сига озера Выштынецкого в различные сезоны года нами установлены гематологические параметры, значения которых находились в пределах нормы для сиговых рыб из олиготрофных водоемов. Это свидетельствует о том, что сиги озера Вишгынецкого имели хорошее физиологическое состояние во всех исследованных районах озера и подтверждает вывод о благоприятных экологических условиях в западном, северном, южном и центральном районах озера Виштынецкого, сделанный на основании анализа гематологических показателей окуня.

ВЫВОДЫ

1. Впервые установлен гематологический статус стерляди и сига по 27-ми параметрам крови, включая восемь цитометрических параметров эритроцитов, определенных автоматически с использованием системы анализа изображений «Видео-Тест-Морфо».

2. Выращивание стерляди разного возраста в УЗВ на корме с добавлением пробиотического препарата «Субтилис» улучшает её физиологическое состояние и рыбоводно-биологические показатели, а также снижает корреляционные связи гематологических показателей с температурой воды и гидрохимическими параметрами, что свидетельствует о стабилизации системы крови стерляди при выращивании в УЗВ.

3. Применение пробиотика «Субтилис» непродолжительное время (в течение месяца) вызывает увеличение у стерляди концентрации гемоглобина, коллоидной устойчивости сывороточных белков, процента метамиелоцитов нейтрофильных, палочкоя-дерных и сегаентоядерных нейтрофилов, общего числа нейтрофилов, площади эритроцитов, их периметра, большой оси и отношения большой оси эритроцита к малой, относительного среднесуточного прироста, среднесуточной скорости роста, коэффициента массонакопления, а также снижение концентрации общего белка в сыворотке крови

4. При длительном действии пробиотика «Субтилис» (1,5 года) наблюдается адаптация организма стерляди разного возраста к данному препарату и стабилизация гематологических параметров у верхней границы значений характерных для осетровых видов рыб.

5. Гематологические показатели стерляди, выращиваемой в УЗВ на протяжении 21-го месяца, свидетельствуют об отсутствии негативных качественных и количественных отклонений в системе крови, что позволяет охарактеризовать её физиологическое состояние как благополучное, а условия выращивания в УЗВ предприятия ООО «КМП Аква» считать благоприятными.

6. Установлены межвидовые различия показателей крови окуня и сига. У сига в летний период отмечается увеличение концентрации гемоглобина, процента псевдоэо-зинофилов и моноцитов, площади, периметра, малой оси эритроцита и фактора формы эллипса. У окуня в летний период выявлено увеличение процента миелоцитов нейтрофильных и малых лимфоцитов.

7. Впервые установлен уровень 27-ми показателей крови окуня и сига озера Виш-тынецкого в разные сезоны года, который свидетельствует об их благополучном физиологическом состоянии и благоприятных экологических условиях в северном, южном, западном и центральном районах озера Виштынецкого в 2008-2009 гг.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для повышения эффективности выращивания стерляди разного возраста в УЗВ, улучшения её физиологического состояния рекомендуется добавлять в корм пробиотический препарат «Субтилис» в концентрации 0,5 мг/кг корма ежедневно 2

раза в день.

2. Для оценки эффективности рыбоводных мероприятий и качества условий выращивания стерляди рекомендуется применять кроме общепринятых такие показатели крови как: процент патологии эритроцитов, юных и зрелых эритроцитов, миелоцитов нейтрофильных, метамиелоцитов нейтрофильных и сегментоядерных нейтрофилов.

3..Установленный нами гематологический статус окуня и сига олиготрофного озера Выштынецкого рекомендуется использовать в сравнительных исследованиях рыб, при оценке их физиологического состояния и условий обитания.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНО В СЛЕДУЮЩИХ РАБОТАХ:

Публикации в изданиях из перечня ВАК Минобрнауки России:

1. Сементина Е.В., Серпунин Г.Г. Рыбоводно-биологическая и гематологическая характеристика ремонтно-маточного стада стерляди, выращиваемой в установках замкнутого водоснабжения // Рыбное хозяйство. - М., 2011а. - С. 76 - 79.

Публикации в других изданиях:

2. Серпунин Г.Г., Сементина Е.В., Савина JI.B. Характеристика крови стерляди разного возраста, выращиваемой в установке замкнутого водоснабжения // Осетровое хозяйство. -2009а.-№3. - С. 46-51.

3. Сементина Е.В., Серпунин Г.Г. Гематологические показатели окуня озера Виштынец-кого в весенний и летний периоды // Труды VII юбилейной международной научной конференции «Инновации в науке и образовании - 2009». - Калининград: КГТУ, 20096. - Ч. 1. - С. 86-89 .

4. Сементина Е.В., Серпунин Г.Г. Гематологические показатели сига озера Виштынецко-го в весенний период // Труды VII юбилейной международной научной конференции «Инновации в науке и образовании - 2009». - Калининград: Изд-во КГТУ, 2009в. - Ч 1. - С. 89-91.

5. Сементина Е.В., Серпунин Г.Г. Характеристика крови окуня озера Виштынецкого в весенний и летний периоды //Известия КГТУ. - Калининград: Изд-во КГТУ, 2010а. - № 17. -С. 104-110.

. 6. Сементина Е.В., Серпунин Г.Г. Влияние пробиотика «Субтилис» на гематологические показатели разновозрастной стерляди, выращиваемой в установке с замкнутым водоснабжением // Труды VIH международной научной конференции «Инновации в науке и образовании - 2010», посвященной 80-летию образования университета. - Калининград: Изд-во КГТУ, 2010.-Ч. 1. - С. 118-121.

7. Сементина Е.В., Серпунин Г.Г. Гематологические показатели сига (Coregonus lavare-tus L.) озера Виштынецкого в период нереста // Труды IX международной научной конференции «Инновации в науке и образовании - 2011». - Калининград: Изд-во КГТУ, 20116. -Ч 1. -С. 51-53.

Заказ № Подписано в печать 22 .11.2011 г. Формат 60x84 (1/16).

Тираж 100 экз. Объем 1,0 п.л.; 1,0 уч.-изд. л.

Издательство ФГБОУ ВПО «КГТУ», 236022, г. Калининград, Советский пр-кт, 1.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сементина, Евгения Владимировна, Калининград

1. Абросимова Н А, Абросимов С С Результаты научных разработок для восстановления популяции донской стерляди // Состояние популяций стерляди в водоемах России и пути их стабилизации сб науч тр МИК, ЦУРЭН, 2004 С 210-220.

2. Аксютина 3 М Элементы математической оценки результатов наблюдений в биологических и рыбохозяйственных исследованиях -М,1968 -289 с

3. Алабастер Дж, Ллойд Р Критерии качества воды для пресноводных рыб М Легкая и пищ пром-сть, 1984 - 344 с

4. Аленичев С В Динамика показателей крови щуки, плотвы и окуня в условиях комплексного техногенного загрязнения // Экологическая физиология и биохимия рыб тезисы докладов IX Всероссийской конференции (май 2000) Ярославль, 2000 - Т 1 - С 4-7.

5. Аленичев С В , Рыжков Л П Цитоморфологический состав крови и динамика гематологических показателей окуня Perca fluviatilis Онежского озера в условиях техногенного загрязнения // Вопросы ихтиологии 2000. - Т 40 - №1 - С. 91-96.

6. Алимов А Ф Введение в продукционную гидробиологию Л , 1989 - 152 с

7. Альтернатива антибактериальным препаратам в аквакультуре / Юхименко Л Н, Бычкова Л И , Пименов А В И др //Рыбоводство 2008. - № 3-4. - С 38-39.

8. Андреева А М Структурно-функциональная организация альбуминовой системы крови рыб // Вопросы ихтиологии 2003. - Т 39, № 6 - С 825 - 832.

9. Анисимова И М, Лавровский В В Ихтиология -М Высшая школа, 1983 180с

10. Артюхова С И., Лапшин А В Использование пробиотиков в кормлении птицы // Сб матер межд конф «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания Современное состояние и перспективы» (Москва, 2-4 июня 2004 г ) -М, 2004 С 130- 131.

11. Баденко JIВ Оценка физиологического состояния молоди осетра и севрюги от естественного нереста и выпускаемого донскими рыбоводными заводами (по показателям крови) // Труды АзНИИРХ, 1966 -Вып8 С 61-79.

12. Берникова T A, Цупикова H А Динамика вод и формирование гидрологических особенностей оз Витынецкого // Известия КГТУ, 2001 № 4 - С 94 - 102.

13. Берникова Т А, Цупикова H А Роль грунтовых вод в формировании гидрологических особенностей оз Виштынецкого//Известия КГТУ, 2001 -№4 С 8993.

14. Бессонов H М, Привезенцев Ю А Рыбохозяйственная гидрохимия М Агропромиздат, 1987 - 159 с

15. Бирман И Б Морской период жизни и вопросы динамики стада тихоокеанских лососей -М Агропромиздат, 1985 -280 с

16. Бретт Д Р Факторы среды и роста // В кн Биоэнергетика и рост рыб М Легкая и пищ пром-ть, 1983 -С 275-345.

17. Бурцев И А Получение потомства от межродового гибрида белуги со стерлядью // Генетика, селекция и гибридизация рыб -М , 1969 С 232-242.

18. Валова В Н, Хованский И Е Сравнительная характеристика физиологических показателей производителей амурских осетровых рыб из естественных популяций и управляемых систем // Вопросы рыболовства 2009. - Т 10 - № 3 (39) - С 575 - 589.

19. Васильева Л М Биологические и технологические особенности товарной аквакультуры осетровых Нижнего Поволжья Астрахань, 2000 - 189 с

20. Васильева Т В Рыбохозяйственные и экологические аспекты эффективности искусственного воспроизводства осетровых рыб Волго-Каспийского бассейна автореф дисс канд биол наук Астрахань, 2010 - 24 с

21. Ведемеер Г А, Мейер Ф П, Смит Л Стресс и болезни рыб М Легкая и пищ пром-сть, 1981 - 128 с

22. Велдре ИР Сезонные изменения свойств крови плотвы и окуня // Вопросы ихтиологии 1959. - Вып 12 - С 138- 140.

23. Вернидуб М Ф Влияние сточных вод газосланцевого производства на физиологические процессы и на развитие личинок молоди лосося // Мат-лы совещ по вопр рыбоводства -М Наука, 1959 С 103-112.

24. Винберг Г Г Особенности экосистемы пресноводных водоемов (из итогов советских исследований по МБП) М Известия АН СССР, сер Биологическая, 1975 -16 с

25. Винберг Г Г Первичная продукция водоемов -Минск, 1960 -329 с

26. Вихман А А Системный анализ иммунологической реакции рыб в условиях аквакультуры -М Экспедитор, 1996 176 с

27. Виштынецкое озеро и малые озера /ТА Берникова, JI А Захаров, В А Шкицкий и др // Виштынецкое озеро природа, история, экология Калининград КГТУ, 2001 - С 84 - 126.

28. Влияние нового препарата МИК БАК на гематологические показатели молоди карпа / Г Г Серпунин, Л В Савина, М К Шабалина и др // Аквакультура и биомониторинг водоемов сб научн тр КГТУ Калининград, 2001 -С 107-115.

29. Ворошилина 3 П, Саковская В Г, Хрусталев Е И Товарное рыбоводство практикум М Колос, 2009 - 266 с

30. Галактионов В Г Очерки эволюционной иммунологии -М МГУ, 1995 -386 с

31. Галаш В Т , Марченко А М , Эллер В С Влияние трихотеценовых микотоксинов на карпа // В кн 8-е Вссоюзн совещ по паразитам и болезням рыб (Тез докл ) Л Наука, 1985. - С 27-29.

32. Гальперин С И Физиология человека и животных М «Высшая школа», 1977. -653 с ил

33. Гамыгин Е А Корма и кормление рыбы // Обзорная информация ЦНИИТЭИРХ -М, 1987 -Вып 1 -82с

34. Гамыгин Е А Некоторые аспекты проблемы кормов и кормопроизводства в аквакультуре // Проблемы и перспективы развития аквакультуры в России материалы / Росрыбхоз, КрасНИИРХ Краснодар, 2001 -С 154-160.

35. Гаркави J1X, Квакина Е Б, Уколова М А Адаптационные реакции и резистентность организма Ростов-на-Дону, 1977 -224 с

36. Гершанович А Д Влияние плотности посадки на рост рыб // Успехи современной биологии, 1984 -Т 98 №1 -С 134- 149.

37. Гершанович А Д, Пегасов В А, Шатуновский М И Экология и физиология молоди осетровых -М Агропрмиздат, 1987 -214 с

38. Гершанович А Д, Тауфиг Л Р Влияние концентрации корма и потности посадки на размер рациона молоди осетровых//Доклад Академии наук СССР, 1991 Т 317 - №5 -С 1277- 1230.

39. Глаголева Т П Инструкция по гематологическому контролю за искусственно выращиваемой молодью лососевых рыб Рига, 1981 -45 с

40. Глаголева Т П, Бодрова Т И Диагностическое значение гематологического анализа у лососевых видов рыб // Корма и методы кормления объектов марикультуры Сб науч тр Всес НИИ рыб хоз-ва и океанографии, 1988 С 121-127.

41. Гмыря И Ф Рост и физиологическое состояние карпа в зависимости от обеспеченности пищи витаминами автореф дис канд биол наук 03 00 10 -Ихтиология -М ВНИИПРХ, 1984 -27 с

42. Головин П П, Головина Н А Влияние стресс-факторов на гематологические показатели и зараженность карпа ихтиофтириусами // Экспресс-инф ЦНИИТЭИРХ, серия «Рыбохоз исп внутр водоемов» -М, 1982 -Вып 4 С 1-5.

43. Головин П П Стресс у рыб / Труды зоологического института АН СССР Вопросы паразитологии и патологии рыб под ред ОН Бауера Л, 1987 -Т 171 -С 22-32.

44. Головина Н А Итоги и перспективы гематологических исследований в ихтиопатологии // Труды зоологического института АН СССР Вопросы паразитологии и патологии рыб под ред ОН Бауера Л, 1987- Т 171 -С 115-125

45. Головина Н А Морфофункциональная характеристика крови рыб объектов аквакультуры автореф дис д-ра биол наук -М, 1996 -53 с

46. Головина Н А , Голвин П П , Быков А Н Действие обловного стресс-фактора на гематологические показатели двухлетков карпа // В кн Эффект исп водоемов Молдавии (Тез докл) -Кишинев, 1982 С 30-31.

47. Головина Н А, Тромбицкий И Д Гематология прудовых рыб Монография -Кишинев Штиинца, 1989 157 с

48. Горизонтов П Д Стресс Система крови в механизме гомеостаза Стресс и болезни //Гомеостаз -М Медицина, 1981 -С 538-570.

49. Гринькова С С Виштынецкое озеро 2010. - http://www.narzem.ru/vishtenec.html Житенева JIД Экологические закономерности ихтиогематологии - Ростов-на-Дону, 1999 - 149 с

50. Житенева J1 Д, Макаров Э В , Рудицкая О А Тромбоциты рыб и других групп позвоночных Ростов-на-До ну, 2003 - 63 с

51. Житенева JI Д , Макаров Э В , Рудницкая О А Эволюция крови Ростов-на-Дону, 2001. - 112 с

52. Житенева J1Д, Полтавцева Т Г, Рудницкая О А Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб Ростов н/ Д Кн изд-во, 1989 - 112 с

53. Житенева Л Д, Рудницкая О А, Калюжная Т И Эколого-гематологические характеристики некоторых видов рыб Справочник Ростов н/Д, 1997 - 149 с

54. Жуков А А, Колосков Ю В Жемчужина области Озеро Виштынец // Калининградский рыболов 2002. - № 2 - С 12-14.

55. Заботина Е А, Камшилова Т Б, Комов В Т Некоторые гематологические характеристики окуня (Perca fluviatilis) из водоемов северо-запада России // Мат-лы междунар конф Озера холодных регионов (июнь 2000) Якутск, 2000 - Ч 5 - С 3138.

56. Заикина А И Применение уплотненных посадок в осетровых прудах // Рыбное хозяйство, 1972 № 5 - С 16-17.

57. Зайцев Г Н Математическая статистика в экспериментальной ботанике М Наука, 1984 -424 с

58. Иешко Е П, Новохацкая О В Закономерности сукцессии паразитофауны рыб эвтрофируемых водоемов // Вопросы ихтиологии, 2008 Т 48 - № 5 - С 696 - 701.

59. Изменение структуры рыбного населения эвтрофируемого озера / ЮС Решетников, О А Попова , О П Стерлигова и др -М Наука, 1982 -247 с

60. Искусственное воспроизводство промысловых рыб во внутренних водоемах России / Ю П Мамонтов, Н Е Гепецкий, А И Литвиненко и др // Труды ГосНИОРХ СПб , 2000 -287 с

61. Калюжная Т И , Житенева Л Д Последствия кратковременного воздействия фенола на икру бестера и стерляди // Тез докл III Всес конф по экологической физиологии рыб -Киев Науковадумка, 1976 -Ч 1 -С 60-61.

62. Камшилов И М Функциональные характеристики проходных осетровых рыб // вопросы ихтиологии, 2000 Т 40 - № 6 - С 832 - 841.

63. Камшилов И М, Камшилова Т Б Влияние температуры на функциональные свойства гемоглобина карася Carassius carassius // Вопросы ихтиологии 2007. - Т 47 - № 4.-С 562-565.

64. Канидьев А Н Биологические основы повышения эффективности искусственного разведения тихоокеанских лососей р Oncorhynchus и Salmo автореф дисс д-ра биол наук -М, 1980 -54 с

65. Канидьев А Н Индустриальное рыбоводство (курс лекций для студентов) М МГЗИПП, 1995 -316 с

66. Канидьев А Н Методы качественной оценки молоди рыб по составу крови (на примере осенней кеты) // Сб науч -иссл раб / Всес науч -иссл ин-т пруд рыб хоз-ва -1970. № 5 - С 236 - 263.

67. Каниева Н А Изменение гематологических показателей у рыб в зависимости от уровня сублетальных концентраций нефти // Междунар конф, посвящ 105-летию КаспНИРХ Современные проблемы Каспия (24 -25 декабря 2002 г ) Астрахань, 2002 -С 130- 132,422.

68. Карасева Т А, Воробьева Н К, Лазарева МЛ Влияние препарата "сухая бактериальная культура ацидофильной палочки" на здоровье и рост радужной форели // Тез докл науч практ конф "Марикультура Северо-Запада России" Мурманск, 2000 -С 22 -23.

69. Карпевич А Ф Теория и практика акклиматизации водных организмов М , 1975-276 с

70. Карпевич А Ф , Коржуев П А , Строганов Н С Задачи экологической физиологии рыб в свете современных требований Современные вопросы экологической физиологии рыб -М Наука, 1979 С 5-11.

71. Каталог 2005 Корма для рыб Калининград, 2005 - 27 с

72. Кашулин Н А, Лукин А А, Амудсен П А Рыбы пресных вод субарктики как биоиндикаторы техногенного загрязнения Апатиты КНЦРАН, 1999 - 142с

73. Квасова И П О белковой системе сыворотки крови налима // Эколого-физиологические особенности крови рыб -М Наука, 1968 С 110-115.

74. Киселев АЮ Установки с замкнутым циклом водоиспользования и технологии выращивания в них объектов аквакультуры // Сер Аквакультура обзорная информация -М ВНИИПРХ, 1997 -Вып 1 80 с

75. Киселев А Ю , Бирюкова Т Б , Жигин А В Возможности интенсивных технологий в аквакультуре // Итоги 30-летнего развития рыбоводства на теплых водах и перспективы на XXI век материалы ВНИИПРХ, ГосНИОРХ, 1998 -С 42-46.

76. Кляшторин JIБ Водное дыхание и кислородное потребление рыб М Легкая и пищ пром-сть, 1982 - 168 с

77. Константинов А С Общая гидробиология -М Высшая школа, 1972 -472 с Константинов А С Общая гидробиология М Высшая школа, 2-е изд , 1986481 с

78. Константинов А С, Зданович В В, Шолохов А М Значение колебаний температуры для выращивания молоди рыб // Рыбное хозяйство 1990.-Вып 11 -С 46 -48.

79. Королева Н В Изменение содержания белка в сыворотке крови радужной форели в зависимости от возраста и питания//Известия ГосНИОРх, 1963 Т 49 - С 17-19.

80. Костюрина А Н, Мельник И В Значение колебаний температуры при выращивании молоди тимирязевской тиляпии // Вестник АГТУ Сер Рыбное хозяйство, 2009. № 2 - С 88-90.

81. Красная книга Россиской Федерации (животные) М ACT, Астрель, 2001 - 860с

82. Крылов О Н Зависимость заболевания рыб на р Каме и Камском водохранилище от гидрологических и гидрохимических факторов среды // Мат-лы XI науч конф Ленинградск ветеринар ин-та СПб, 1962 -С 36-42.

83. Крылов О Н Методические указания по гематологическому обследованию рыб в водной токсикологии Л ГосНИОРХ, 1974 -39 с

84. Кузьмина В В Электрофоретическое изучение белков сыворотки крови рыб при длительном голодании//Гидробиологический журнал -М,1966 Т 2 - Вып 4 -С 3236.

85. Кузьмичев С А , Новиков Г Г , Павлов Д С Некоторые особенности осморегуляции молоди осетровых рыб // Вопросы ихтиологии 2005. - Т 45 - № 6 - С 844-853.

86. Кулаков Г В Субтилис натуральный концентрированный пробиотик - М ООО Типография «Визави», 2003 - 48 с

87. ЛакинГФ Биометрия -М, 1980 293 с

88. Лакин Г Ф Биометрия учеб пособие для биол спец вузов 4-е изд, перераб и доп -М Высш шк, 1990 - 352 с

89. Лапухин Ю А, Паномарев С В, Сорокина М Н Сравнительная оценка функционального состояния молоди гибрида стерлядь х белуга // Вестник АГТУ, 2008 -№ 3 (44) С 14-16.

90. Левина Э Н Общая токсикология металлов Л Медицина, 1972 - 187 с

91. Леоненко Е П Морфофизиологические показатели карпа, обыкновенного толстолобика и белого амура в условиях Белоруссии автореф дисс канд биол наук -Калининград, 1968 -21 с

92. Леоненко Е П Оснащенность организма рыб гемоглобином как показатель их жизнестойкости и продуктивности // Эколого-физиологические особенности крови рыб -М, 1968 С 42-49.

93. Леоненко Е П Физиологические исследования в рыбоводстве // Рыбоводство и рыболовство 1965. - № 1 - С 21-22.

94. Лугаськова Н В Эколого-физиологические особенности крови сиговых рыб в период нагула в субарктической зоне бассейна реки Оби // Вопросы ихтиологии 2003. -Т 43 - №6 - С 835 - 841.

95. Лугаськова Н В , Насыйров Р А Адаптивные особенности системы крови окуня и линя в условиях загрязнения и эвтрофикации водоемов // Сибирский экологический журнал 2001.-Т 8 - №6 - С 735-739.

96. Лукин А А, Шарова Ю Н, Прищепа Б Ф Влияние промысла на состояние популяций сига Coregonus lavaretus в озере Имандра // Вопросы ихтиологии 2006. - Т 46. -№3 -С 370-377.

97. Лукьяненко В И Зависимость токсикорезистентности рыб от исходного физиологического состояния // Тез докл III Всес научн конф по водной токсикологии -Петрозаводск, 1975 -С 31-34.

98. Лукьяненко В И Ихтиотоксикология -М Агропром, 1983 383 с

99. Лукьяненко В И Коллоидная устойчивость сывороточных белков осетровых // Труды/Центр н-и ин-тосетр хоз-ва М, 1970 -Т 2 - С 203 -214.

100. Лукьяненко В И Общая ихтиотоксикология -М Легкая и пищ пром-сть, 1983320 с

101. Лукьяненко В И Физиолого-биохимический статус вол го-каспийских осетровых в норме и при расслоении мышечной ткани (кумулятивный политоксикоз) Рыбинск, 1990 -44 с

102. Лукьяненко В И , Дубинин В И , Сухопарова А Д Влияние экстремальных условий приплотинной зоны реки на осетровых рыб Рыбинск, 1990 - 272 с

103. Лукьяненко В И , Седов С И , Терентьев А А Сравнительная иммунохимическая характеристика осетровых Волги и Дуная // Некоторые вопросы осетрового хозяйства Каспийского бассейна М, 1968 -Вып 3 -С 62-66.

104. Маслова M H, Солдатов А А, Тавровская Т В Сезонная динамика состояния системы красной крови некоторых черноморских рыб // Журнал эволюционной биохимии и физиологии, 1998 -Т 27 С 796-798.

105. Матишов Г Г, Пономарева Е Н, Балыкин П А Выращивание осетровых рыб в условиях замкнутого водоснабжения // Исследования водных биологических ресурсов камчатки и северо-западной части Тихого океана 2008. - Вып 11 - С 47 - 56.

106. Методы оценки гематологических характеристик // Физиология и биохимия гидробионтов http://bugayov.moy.su

107. Микряков В Р, Балабанова Л В , Микряков Д В Влияние транспортировки на состав лейкоцитов периферической крови карпа Cyprinus carpió L // Вопросы рыболовства 2007. - Т 8 - № 2 (30) - С 209-214.

108. Микряков В Р , Балабанова Л В , Микряков Д В Реакция лейкоцитов стерляди Acipenser ruthenus на гормониндуцируемый стресс // Вопросы ихтиологии 2009. - Т 49 - № 4 - С 554-557.

109. Микряков В Р, Лапирова Т Б Влияние солей некоторых тяжелых металлов на картину белой крови молоди ленского осетра Acipenser baeri Brandt // Вопросы ихтиологии 1997 Т 37 - № 4 - С 538 - 542.

110. Микряков Д В Влияние некоторых кортикостеройдных гормонов на структуру и функцию иммунной системы рыб автореф дис канд биол наук М ИПЭЭ РАН, 2004. - 24 с

111. Микряков Д В , Балабанова Л В , Микряков В Р Влияние транспортировки на состав лейкоцитов периферической крови и иммунокомпетентных органов стерляди Acipenser ruthenus L // Осетровое хозяйство, 2010 № 4 - С 10-15.

112. Микряков Д В, Микряков В Р Влияние гидрокортизона на антителообразовательную функцию иммунной системы карпа Cyprinus carpió // Вопросы ихтиологии -2002.-Т 42 № 6 - С 820-824.

113. Микряков Д В , Силкина Н И , Суворова Т А Изменение функциональной активности гуморальных факторов неспецифического иммунитета карпа Cyprinus carpió под влиянием антибактериального препарата и пробиотика // Ветеринария Кубани 2010. -№ 6 - С 14-17.

114. Мильштейн В В Осетроводство -М Пищевая пром-сть, 1972 129 с

115. Мина М В , Клевезаль Г А Рост животных -М Наука, 1976 -291 с

116. Моисеев П А , Азимова Н А , Куранова И И Ихтиология -М, 1981 383 с

117. Моисеенко Т И Гематологические показатели рыб в оценке их токсикозов (на примере сига Coregonus lavaretus) // Вопросы ихтиологии 1998.-Т 38 - № 3 -С 371 — 380.

118. Моисеенко Т И Теоретические основы нормирования антропогенных нагрузок на водоемы Субарктики Апатиты Кольск НЦ РАН, 1997 -261 с

119. Мусатова Г Н Суточные рационы и кормовые коэффициенты у молоди осетровых //Труды ВНИРО, 1971 -Т 81 -С 114-127.

120. Мусселиус В А Лабораторный практикум по болезням М Легкая и пищ пром-сть, 1983 -290 с

121. Мусселиус В А, Стрелков Ю А Болезни рыб и борьба с ними в условиях современного рыбоводства // Труды зоологического института АН СССР Вопросы паразитологии и патологии рыб под ред ОН Бауера Л, 1987 -Т 171 -С 14-21.

122. Немова Н Н, Высоцкая Р У Биохимическая индикация состояния рыб М Наука, 2004 -215 с

123. Никаноров С И Обоснование сохранения стерляди в водоемах России // Состояние популяций стерляди в водоемах России и пути их стабилизации сб науч тр МИК, ЦУРЭН М , 2004 - С 6-10.

124. Никаноров С И, Александров А К, Малютин В С Состояние популяций стерляди в водоемах России и пути их стабилизации М , 2004 - 230 с

125. Никольский Г В Теория динамики стада рыб М Наука, 1965 - 380 с

126. Николюкин Н И , Бурев И А Иструкция по разведению и товарному выращиванию гибридов белуги со стерлядью М ВНИРО, 1969 - 52 с

127. Новоженин Н П Использование анестезирующих веществ в рыбоводстве // Сборник трудов ВНИИПРХ М, 1969 -Т 16 - С 258-271.

128. Носаль А Д Сиговое хозяйство на Украине // Рыбное хозяйство 1955. - № 5 - С 32-35.

129. Нусенбаум Л М К вопросу о форме эритроцитов у рыб // Вопросы ихтиологии ДАН СССР, 1953 -Т 90, №5 -С 889-892.

130. Озеро Виштынецкое / У18ТУС10 ЕгЕЯАЗ / отв ред. К В Тылик, С В Шибаев -Калининград Изд-во ИП Мишуткина И В , 2008. 144 с.

131. Опыт выращивания осетровых рыб в условиях замкнутой системы водообеспечения для фермерских хозяйств / Г Г Матишов, Д Г Матишов, Е Н Пономарева и др Ростов-на-Дону Изд-во ЮНЦ РАН, 2006 - 72 с

132. Остроумова И Н Белковый состав сыворотки крови лососевых рыб // Обмен веществ и биохимия рыб М , 1967 - № 2 - С21-23.

133. Остроумова И Н Методические указания по использованию анализа крови для оценки качества выращивания молоди Л , 1966 - 11 с

134. Остроумова И Н Физиологическая оценка состояния рыб при искусственном разведении // Современные вопросы экологической физиологии рыб М Наука, 1979 -С 56-67.

135. Остроумова И Н Форменные элементы крови в развитии лосося // Труды / Совещ по физиологии рыб -М АН СССР, 1958 -С 380-386.

136. Остроумова И Н Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови радужной форели // Изв Гос н -и ин-т оз и реч рыб хоз-ва Л , 1969 - Т 68 - С 7989.

137. Остроумова Ш Н Показатели крови и кроветворения в онтогенезе рыб // Известия ГосНИОРХ, 1957 -Т 43 Вып 3 - С 92-113.

138. Отечественные добавки о НИИ пробиотиков Корма и кормление // Деновик М , 2009. - 25 с

139. Панасенко В В Использование пробиотиков в кормах для рыб компании ПРОВИМИ // Тезисы докл междунар науч конф «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны» (Азов, июнь 2006 г) Ростов н/Д ЮНЦ РАН, 2006.-С 70-71.

140. Панасенко В В Рыбоводство Пути снижения затрат при выращивании рыбы // Рыбоводство 2008. - № 1 - 74 - 78.

141. Пегасов В А Морфофизиологические и биохимические показатели осетровых при садковом выращивании // Морское рыбоводство / Marine fish farming Сб науч тр / ВНИИ мор рыб хоз-ва и океанографии -М ВНИРО, 1984 С 145- 152.

142. Первый этап разработки уравнений роста рыб на вегетативных стадиях развития / ВФ Резников, С А Баранов, Е А Стариков и др //Сб науч тр ВНИИПРХ М, 1978 -С 220-236.

143. Петрова Т Г Стерлядь как объект аквакультуры // Актуальные вопросы пресноводной аквакультуры сб науч тр ВНИИПРХ М, 2002 - С 75-79.

144. ПлохинскийНА Биометрия -М МГУ, 1970 -367 с

145. Подушка С Б Ремонтно-маточные стада в осетроводстве // Проблемы современного товарного осетроводства Сборник докладов первой науч -практ конф -Астрахань, 2000 С 78-83.

146. Пономарев С В , Иванов Д И Осетроводство на интенсивной основе М Колос, 2009. - 323 с

147. Попов О П Влияние изменчивости некоторых компонентов крови карпа и сазана на коллоидную устойчивость сывороточных белков // Гидробиологический журнал, 19766 Т 12. - № 4 - С 92-95.

148. Попов О П Гематологические индикаторы интенсивности пластического обмена карпа и сазана // Экологическая физиология рыб тезисы докладов III Всесоюзной конференции -Киев, 1976 -Ч 1 -С 105-106.

149. Похиленко В Д, Перелыгин В В Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопастность // Новости медицины и фармации, 2008 № 18 (259) - С 56 -63.

150. Правдин И Ф Руководство по изучению рыб М , 1966 - 375 с

151. Привезенцев Ю А Гидрохимия пресных водоемов М Пищевая пром-сть, 1973- 118 с

152. Приказ Федерального агентства по рыболовству от 10 декабря 2008 г № 393 г Москва "Об утверждении Правил рыболовства для Западного рыбохозяйственного бассейна", приложение № 2 // Российская газета, 27 февраля 2009 г Федеральный выпуск № 4858

153. Пробиотический препарат СУБ-ПРО (субалин) альтернатива антибиотикам / Бычкова Л И , Юхименко Л Н , Ходак А Г и др // Рыбоводство - 2008. - № 2 С 48 - 49.

154. Пустовит Н С, Пустовит О П Некоторые гематологические показатели молоди камчатской микижи Parasalmo mykiss // Вопросы ихтиологии 2005. - Т 45 - № 5 - С 680 - 688.

155. Пучков HB Физиология рыб М, 1954 -371 с

156. Разработка технологии выращивания посадочного материала форели и карпа в циркуляционных системах отчет о НИР / Калинингр техн ин-т рыб пром-сти и хоз-ва, руководитель В А Шутов 85-11, № ГР 01850061168, Инв № 02860054135 -Калининград, 1985 - 175 с

157. Результаты разработки методов формирования маточных стад стерляди в условиях замкнутого водообеспечения / Пономарева Е Н и др // Вестник АГТУ Сер Рыбное хозяйство 2010. - № 1 - С 86-90.

158. Решетников Ю С Проблема реолиготрофирования водоемов // Вопросы ихтиологии 2004 Т 44 - № 5 - С 709-911.

159. Решетников Ю С Современные проблемы изучения сиговых рыб // Вопросы ихтиологии 1995. - Т 35 - № 2 - С 156 - 174.

160. Решетников Ю С Экология и систематика сиговых рыб -М Наука, 1980 -301 с

161. Розен В Б Основы эндокринологии -М Изд-во МГУ, 1994 -384 с

162. Руднева И И, Скуратовская Е Н Половые особенности активности антиоксидантных ферментов крови некоторых прибрежных видов рыб Черного моря // Вопросы ихтиологии 2009. - Т 49 - № 1 - С 125 - 128.

163. Руссо Р Последние достижения в исследованиях токсичности нитритов дпя рыб // Теоретические вопросы водной токсикологии Л Наука, 1981 -С 186- 196.

164. Рыбохозяйственный кадастр трансграничных водоемов России (Калининградская область) и Литвы / С В Шибаев, М М Хлопников, А В Соколов и др Калининград Изд-во «ИП Мишуткина», 2008 - 200 с ISBN 978-5-98787-046.

165. Рыжова Л Н Гематологические параметры некоторых лососевидных рыб оз Байкал//Вопросы ихтиологии -1981.-Т 21 Вып 2 - С 356-365.

166. С микотоксинами можно бороться (новые свойства хитозана) / П П Головин, Н А Головина, Н В Гусева и др // Рыбное хозяйство 2000. - № 4 - С 47-48.

167. Савина Л В Использование гематологических показателей рыб для оценки новой кормовой добавки МИК БАК и экологического состояния естественных водоемов дисс канд биол наук Калининград Изд-во КГТУ, 2004 - 188 с

168. Селье Г Очерки об адаптационном синдроме -М Медгиз, 1960 -98 с

169. Сементина Е В, Серпунин Г Г Гематологические показатели окуня озера Виштынецкого в весенний и летний периоды // Труды VII юбилейной международной научной конференции «Инновации в науке и образовании 2009». - Калининград КГТУ, 20096 - Ч 1 - С 86-89 .

170. Сементина Е В, Серпунин Г Г Гематологические показатели сига озера Виштынецкого в весенний период // Труды VII юбилейной международной научной конференции «Инновации в науке и образовании 2009». - Калининград Изд-во КГТУ, 2009в -Ч 1 -С 89- 91.

171. Сементина Е В, Серпунин Г Г Рыбоводно-биологическая и гематологическая характеристика ремонтно-маточного стада стерляди, выращиваемой в установках замкнутого водоснабжения // Рыбное хозяйство М , 2011а - С 76-79.

172. Сементина Е В , Серпунин Г Г Характеристика крови окуня озера Виштынецкого в весенний и летний периоды // Известия КГТУ Калининград Изд-во КГТУ, 2010а - № 17.-С 104-110.

173. Серпунин Г Г Влияние введения антиоксиданта анфелана в рыбную муку корма 10-ЭК на гематологические показатели форели камлоопс // Комбикорма и обмен веществ у рыб сб науч тр Калинингр техн ин-та рыб пром-сти и хоз-ва Калининград, 1991 -С 45 - 53.

174. Серпунин Г Г Гематологическая характеристика молоди канального сома, выращиваемой в установке с замкнутым водоснабжением // Экологическая физиология и биохимия рыб тез докл VII Всес конф , г Ярославль, май 1989 г Ярославль, 1989 - С 131 - 132.

175. Серпунин Г Г Гематологическая характеристика рыбы, выращиваемой на различных кормах // Науч -техн конф проф -препод состава, аспир и сотр Калинингр техн ин-та рыб пром-сти и хоз-ва тез докл -Калининград, 1994 С 22

176. Серпунин Г Г Гематологические показатели адаптации рыб дисс д-ра биол наук Калининград, 2002 - 482 с

177. Серпунин Г Г Гематологические показатели адаптаций рыб Монография -Калининград Изд-во ФГОУ ВПО «КГТУ», 2010 460 с

178. Серпунин Г Г Гематологические показатели карпа при интенсивном прудовом выращивании автореф дис канд биол наук -М ИЭМЭЖ АН СССР, 1983 -24 с

179. Серпунин Г Г Закономерности функционирования системы крови рыб, выращиваемых в установке с замкнутым водоснабжением тез докл науч -техн конф проф-пред сост , аспирантов и студентов КТИПРХ Калининград, 1993 - С 31

180. Серпунин Г Г Оценка физиологического состояния рыбы в аквакультуре по гематологическим показателям // Экологическая физиология и биохимия рыб тез докл VIII научн конф -Петрозаводск, 1992 -Т 1 С 98 - 99.

181. Серпунин Г Г Показатели крови радужной форели, выращиваемой в рециркуляционной установке с дисковым биофильтром // Вопросы экологии, физиологии рыб, ихтиопаталогии сб науч тр КТИПРХ Калининград, 1990 - С 55 -63.

182. Серпунин Г Г , Коробейникова Е Г Реакция системы крови карпа (Cyprinus carpió L) на воздействие тяжелых металлов // Тез докл 1-го конгр Ихтиологов России Астрахань НПО БИОС, 1997 С 237-238.

183. Серпунин Г Г, Савина JIВ Методы гематологических исследований рыб методические указания для самостоятельной работы студентов высших учебных заведений по направлению 110900 68 Водные биоресурсы и аквакультура -Калининград Издательство КГТУ, 2005 - 54 с

184. Серпунин Г Г , Сементина Е В , Савина JIВ Характеристика крови стерляди разного возраста, выращиваемой в установке замкнутого водоснабжения // Осетровое хозяйство -2009а №3 -С 46-51.

185. Сидоров В С Экологическая биохимия рыб Липиды Л Наука, 1983 -240 с

186. Скляров В Я , Гамыгин Е А , Рыжов Л П Кормление рыб М , 1984. - 119 с

187. Скорняков В И , Аполлова Т А , Мухордова А Л Практикум по ихтиологии М , 1986. - 269 с

188. Смирнова Л И О сезонных изменениях крови рыб Рыбинского водохранилища // Вопросы ихтиологии -М , 1962 Т 2 - Вып 4 - С 15-18.

189. Смирнова ЛИ О физиологии зернистых лейкоцитов крови рыб // Вопросы ихтиологии 1968. - Т 8 - Вып 5 (52) - С 939 - 948.

190. Смирнова Л И Сезонные изменения лейкоцитарного состава крови леща и окуня // Гидробиологический журнал М, 1966 -№4 - С 71-74.

191. Сорвачев К Ф Изменение белков сыворотки крови карпа во время зимовки // Биохимия М, 1957 - Т 22 - Вып 5 -С 14-16.

192. Справочник по физиологии рыб / Яржомбек А А , Лиманский В В , Щербина Т В и др -М Агропромиздат, 1986 192с

193. Справочник рыбовода / Под ред НИ Кожина -М Пищевая пром-сть, 1971208 с

194. Стерлигова О П , Савосин Д С , Ильмаст Н В Сравнительная характеристика многотычинковых сигов Coregonus lavaretus (Cjregonidae) Сямозера и Тумасозера // Вопросы ихтиологии 2010. - Т 50 - № 3 - С 427 - 432.

195. Стеффенс В Индустриальные методы выращивания рыб М , 1983 - 311 с

196. Стребкова Т П, Кудряшов А Г Влияние сезона и условий выращивания на белковую картину крови чешуйчатых карпов // Эколого-физиологические особенности крови рыб -М Наука, 1968 -С 103-110.

197. Строганов Н С Акклиматизация и выращивание осетровых рыб в прудах // Эколого-физиологические и биохимические исследования -М Изд Моек ун-та, 1968 -377 с

198. Тарасенко С Н, Мельников В Г Морфологическая структура форменных элементов крови леща, сазана и судака // Современные вопросы экологической физиологии рыб М, 1979 - С 239-246.

199. Тенклер И В Адаптация молоди белуги к искусственному корму и стандат посадочного материала при выращивании ее в морских садках // В кн Осетровое хозяйство водоемов СССР Астрахань, 1984 - С 262 - 263.

200. Терсков Г В, Гительзон И И Метод химических (кислотных) эритрограмм Биофизика -М Наука, 1957 Т 2 - Вып 2 -247 с

201. Титарев Е Ф Характеристика физиологического состояния радужной форели по некоторым гематологическим показателям // Сб науч тр / Всес н -и ин-т пруд рыб хоз-ва -1974.-Вып 10 С 197-205.

202. Тромбицкий ИД К морфологии клеток крови сеголеток белого толстолобика НурорЬШактсЫЬув тоШпх // Интенсификация рыбоводства Молдавии Кишинев, 1982 -С 75-83.

203. Тылик К В Ихтиофауна водоемов Калининградской области Калининград, 2003- 135 с

204. Тылик К В Рыбы трансграничных водоемов России и Литвы. ЯиЗООЗ Ш ЫЕТиУОЗ УАШЕТО ТЕЬЮГШ гиУУБ. Калининград Изд-во ИП Мишуткина И В , 2007. - 120 с

205. Федорченко В И, Новоженин Н П, Зайцев В Ф Товарное рыбоводство М Агропромиздат, 1992 - 67 с

206. Хайтов Р М, Лесков В П Иммунитет и стресс // Российский физиологический журнал им ИМ Сеченова, 2001 -Т 87 №8 - С 1060- 1072.

207. Халько В В Закономерности формирования продукционных показателей молоди рыб разных экологический групп автореф дис канд биол наук М ИЭМЭЖ АН СССР, 1983 -24 с

208. Чалов В В , Пономарева Е Н Показатели водной среды и аммонийный азот в системе замкнутого водообеспечения при содержании объектов аквакультуры // Вестник АГТУ Сер Рыбное хозяйство 2010. - № 1 - С 92-95.

209. Чекунова В И Скорость и уровень обмена у рыб разных экологических групп // Вопросы ихтиологии, 1974 Т 7 - Вып 2 - С 312-319.

210. Черникова В В Гематологическая характеристика зимующего сеголетка карпа // Известия Гос н-и ин-тоз и реч рыб хоз-ва Л, 1974 -Т 88 -С 109-134.

211. Черникова В В Показатели крови у пресноводных рыб в летне-осенний период // Обмен веществ и биохимия рыб -М Наука, 1967 -№2 С 8-11.

212. Чугунова Н И Руководство по изучению возраста и роста рыб М Изд-во АН СССР, 1959 - 162 с

213. Шатуновский М И Экологические закономерности возрастной и сезонной динамики обмена веществ у рыб // Биологические основы рыбоводства Актуальные проблемы экологической физиологии и биохимии рыб -М Наука, 1976 С 28-30.

214. Шатуновский М И Экологические закономерности обмена веществ морских рыб -М Наука, 1980 -281 с

215. Шульман Г Е Физиолого-биохимические особенности годовых циклов рыб М Пищ пром-сть, 1972 - 368 с

216. Юхименко Л Я , Койдан Г С , Бычкова Л Я Перспективы использования субалина для коррекции микрофлоры кишечника и профилактики БГС // Тезисы докл науч практ конф "Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре" М МИК, 2000 - С 133 -136.

217. Яндовская Н И , Казаков Р В , Лейзерович X А Инструкция по разведению атлантического лосося Л Изд-во ГосНИОРХ, 1979 - 96 с

218. Acclimation of goldfisli to low concentrations of oxygen / C.Z. Prosser et al // Physiol. Zool, 1957. V. 3. - № 2. - P. 95 - 104.

219. Allanson B.R., Bok A., Van Wyk N.I. 1971. The influence of exposure to low temperature on Tilapia mossambica Peters (Cichlidae) // Changes in serum osmolarity, sodium, and chloride ion concentrations. J. Fich Biol., 1971. V. 3. - P. 181 - 185.

220. Anderson D.P. Immunological indicators: effects of environmental stress on immune protection and disease outbreaks // Amer. Fich Soc. Symp., 1990. V. 8. - P. 38 - 50.

221. Cadmium, chromium, and copper induce polychromatocyte micronuclei in carp (Cyprinus carpio L.) / Y. Zhu et al. // Bull. Environ. Contam. and Toxicol, 2004. V.72, № 1. -P. 78-86.

222. Casillas E., Smith L.S. Effect of stress on blood coagulation and haematology in ainbow trout (Salmo giardneri). J. Fish Biol., 1977. - Vol. 10. - № 5. - P. 481-491.

223. Effect of cadmium on blood of Tilapia, Oreochromis mossambicus (Peters), during prolonged exposure / S.G. Ruparellia et al. // Bull. Environ. Contam. and Toxicol, 1990. V.45, № 2.-P. 305 -312.

224. EPA (Environmental Protection Agency) // Water Quality Criteria 1972. Washington, D.C. EPA-R-73-033. March 1973. - 594 pp.

225. Foote P.S. Blood lactid acid levels and mortality of American shad (Alosa sapioissim) utilizing the Holyoke dam fishlift Massachysetts, 1974 and 1975. Proc. Workshop Amer. Shad. Amherst, Mas., 1976. - S. 1. - P. 261-284.

226. Holland R.A., Forster R.E. Kinetics of uptake of 02 and CO by led blood cells // J. Physiol, 1968. Vol. 49. - P. 553 - 572.

227. McLeay D. J., Gordon M.R. Leucocrit: a simple hematological technigue for measuring acute stress in salmonid fish, including stressful concentrations of pulpmill effluent. J. Fish. Res. Board Can., 1977. - Vol. 34. - № 11. - P. 2164-2175.

228. Pickering A.D. Endocrine-induced pathology , in stressed salmonid fich // Fich. Res., 1993. V. 17. - P. 35 - 40.

229. Pickering A.D. Introduction: the concept of biological stress // Stress and Fich. A.D. Pickering (ed.). London-N.Y.: Acad. Press, 1993. - P. 1 - 9.

230. Reshetnikov Yu. S. An overview of research on coregonids in the USSR // Pol. Arch. Hydrobiol, 1992. V. 39. - № 3 4. - P. 367 - 376.

231. Reshetnikov Yu. S. Changes of the fish community of lake ecosystems in recent conditions // Topical problems of ichthyology. Czechosl. Acad. Sci. Brno, 1981. P. 113 - 118.

232. Reshetnikov Yu. S. Coregonoids and the problem of reoligotrophication of waters bodies in Russia // Coregonid Int.symp. Biology and Management of Coregonid Fishes (Olsztyn, IX, Poland 21 27 August). - Olsztyn, 2005. - P. 57.

233. Ruttner F. Fundamentals of Limnology // University of Toronto Press, 1953. 242 pp.

234. Sarig S. On the phenomenon of mass mortalities of silver carp in Israel due to stress conditions while handling. Bull. Office Int. Episoot., 1977. - V. 87, № 5-6. - P. 445-448.

235. Schaperclaus W. Textbook of Pond Culture // U.S. Department of the Interior, Fish and Wildlife Service, Fishery Leaflet 311. Washington, 1933. - 260 pp.

236. Sebert P., Simon B., Barthelemy L. Effect of temperature increase on oxygen consumption of yellow freshwater eels exposed to high hydrostatic pressure // Exp. Physiol., 1995. V. 80, № 6. - P. 1039 - 1046.

237. Serpunin G.G. Using of image analises system" Videotest" in ichtyohaematology // 4th International Ichtiogematology conferce. Czech. Republic, 1995. P. 23.

238. Thuvander A. The immune system of salmonid fish: establishment of methods for assessing effects of aquatic pollutants on the immune response // Dissertatio Abstr. Int, 1992. -V.52, №2.-P. 2-16.

239. Van Rooij J.M., Videler J.J. Estimating oxygen uptake rate from ventilation frequency in the reef fish Sparisoma viride // Mar. Ecol. Progr. Ser., 1996. V. 132, № 1. - P. 31 - 41.

240. Wedemeyer G. The role of stress in the disease resistance of fishesin // Symposium on Disease of Fishes and Shellfishes. Washington, 1970. - Spec. Publ. No. 5. - P. 30 - 35.

earthpapers.net


Смотрите также

 

..:::Новинки:::..

Windows Commander 5.11 Свежая версия.

Новая версия
IrfanView 3.75 (рус)

Обновление текстового редактора TextEd, уже 1.75a

System mechanic 3.7f
Новая версия

Обновление плагинов для WC, смотрим :-)

Весь Winamp
Посетите новый сайт.

WinRaR 3.00
Релиз уже здесь

PowerDesk 4.0 free
Просто - напросто сильный upgrade проводника.

..:::Счетчики:::..